红花石蒜ISSR-PCR反应体系的建立

杨志玲; 冯刚利; 谭梓峰; 栾启福; 王承南

红花石蒜ISSR-PCR反应体系的建立

1.
中国林业科学研究院亚热带林业研究所, 浙江富阳　311400
2.
中南林学院资源与环境学院, 湖南长沙　410004
3.
中南林学院资源与环境学院, 湖南长沙　410004
基金项目:
浙江省重点农业项目(2004C22041)部分内容

Establishment of ISSR-PCR in Lycoris radiata

1.
Research Institute of Subtropical Forestry, CAF, Fuyang 311400, Zhejiang, China
2.
College of Resources and Environment of CSFU, Changsha 410004, Hu'nan, China
3.
College of Resources and Environment of CSFU, Changsha 410004, Hu'nan, China

摘要: 以红花石蒜叶片基因组DNA为模板,分析了模板DNA、引物、dNTPs、Mg2+的浓度及Taq DNA聚合酶的用量对ISSR-PCR扩增结果的影响。建立了石蒜ISSR分析最优化的反应体系及应用程序:即25μL反应体系中,有20 ng模板DNA、0.5μmol.L-1随机引物、150μmol.L-1dNTPs、2.0 mmol.L-1Mg2+、1.0 U Taq DNA聚合酶。反应程序为:94℃预变性5 m in;然后45个循环:每个循环94℃变性45 s,55℃退火60 s,72℃延伸2 m in;循环结束后72℃延伸7 m in。
- 红花石蒜
- / 叶片
- / ISSR-PCR
Abstract: In this paper,the influencing factors of inter-simple sequence repeat(ISSR) were analyzed by using genomic DNA of Lycoris radiata.By adjusting the concentration of template DNA,Mg2+,dNTPs and primer,the contents of Taq DNA polymerase and the different temperature,the stable and reproducible optimum reaction system of ISSR-PCR amplification and PCR amplification parameters were established for L.radiata.The optimal system contains 20 ng template DNA,1.0 U Taq DNA polymerase,2.0 mmol·L-1 Mg2+,150 μmol·L-1 dNTPs and 0.5 mmol·L-1 primer in 25 μL reaction volume.The amplification program was: after l cycle initial denaturation at 94 ℃ for 5 min,each 45 cycles consist of 94 ℃ 45 s,55 ℃ 50 s,72 ℃ 2 min,then final extension was at 72 ℃ for 7 min.
- L.radiata
- / leaves
- / ISSR-PCR

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