油桐ISSR-PCR最佳反应体系的建立

李鹏; 汪阳东; 陈益存; 张小平

油桐ISSR-PCR最佳反应体系的建立

1.
安徽师范大学生命科学学院,安徽芜湖241000
2.
中国林业科学研究院亚热带林业研究所,浙江富阳311400
3.
中国林业科学研究院亚热带林业研究所,浙江富阳 311400
4.
安徽师范大学生命科学学院,安徽芜湖 241000
基金项目:
浙江省重大科技攻关项目“油茶油桐乌桕三种木本油料能源树种新品种选育及中试”(2006C12016)

Establishment of Optimum ISSR2PCR Reaction Systemin Tung O il Tree(Ve rn ic ia fordii)

1.
College of Life Science, Anhui Normal University, Wuhu 241000, Anhui, China
2.
Research Institute of Subtrop ical Forestry, CAF, Fuyang 311400, Zhejiang, China

摘要: 在油桐遗传多样性研究中,为了获得清晰可靠、重复性强的ISSR扩增结果,综合采用单因子试验和正交设计两种方法对影响油桐ISSR-PCR反应结果的4个因素( Taq酶、Mg2+ 、dNTP、引物)进行优化试验。单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影响,找出最佳反应水平。正交设计选用L9 (34 )方案,采用直观分析获得影响因素最佳反应水平。通过综合比较分析,最终建立了油桐ISSR2PCR反应的最佳反应体系,即在20μL反应体系中, Taq DNA聚合酶1. 0 U,Mg2+ 2. 0 mmol·L-1 , dNTP 0. 20 mmol·L-1 ,引物0. 4μmol·L-1 , 1 ×PCR缓冲液, 40 ng模板DNA。
- 油桐
- / ISSR-PCR
- / 单因子试验
- / 正交设计
Abstract: To app ly ISSR to genetic breeding of tung oil tree (Vernicia fordii) , both the single factor test and theorthogonal diagram were used to op timize the ISSR amp lification system of tung in four factors ( Taq DNApolymerase,Mg2+ , dNTP, p rimer) at three levels respectively. There were some differences between the results ofthe two methods. Through comp rehensive analysis, a suitable ISSR-PCR reaction system was established: 20 μLreaction system containing 1. 0 U Taq DNA polymerase, 2. 0 mmol·L-1 Mg2+ , 0. 20 mmol·L-1 dNTP, 0. 4μmol·L-1 p rimer, 1 ×PCR buffer, 40 ng temp late.
- Vernicia ford ii
- / ISSR-PCR
- / single factor tests
- / orthogonal design

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