白蜡虫蜡酯合酶基因cDNA全长克隆及原核表达

刘博文; 王雪庆; 孙涛; 亓倩; 于淑惠; 杨璞; 陈晓鸣

白蜡虫蜡酯合酶基因cDNA全长克隆及原核表达

1.
中国林业科学研究院资源昆虫研究所, 国家林业局资源昆虫培育与利用重点实验室, 云南昆明 650224
基金项目:
国家863计划（2014AA021801）;林业公益性行业科研专项（201504302、201304808）;云南省应用基础研究重点项目（2013FA052）;国家自然科学基金（31572337）
中图分类号: S899.1

Cloning and Prokaryotic Expression of Wax Synthase Gene of the Chinese White Wax Scale

1.
Research Institute of Resources Insects, Chinese Academy of Forestry, Key laboratory of Cultivating and Utilization of Resources Insects of State Forestry Administration, Kunming 650224, Yunnan, China
CLC number: S899.1

摘要: ［目的］本研究旨在获得白蜡虫蜡酯合酶（wax synthase，WS）基因cDNA全长，并在大肠杆菌中表达，为后续功能研究奠定基础。［方法］采用Rapid Amplification of cDNA End（RACE）技术扩增ws基因3'及5'末端序列，在获得ws基因cDNA全长的基础上，构建原核表达载体，转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导表达白蜡虫WS。［结果］序列分析表明，白蜡虫ws基因cDNA全长 1518bp，ws基因开放阅读框1356bp，5'端非编码区94bp，3'端非编码区68bp，编码452个氨基酸，预测蛋白质分子量为51.8kDa，等电点为6.35。Western Blot检测表明目的蛋白在大肠杆菌中表达。［结论］本研究获得了白蜡虫cDNA全长，并在大肠杆菌中成功表达，为其它昆虫蜡酯合成研究提供了参考。
- 白蜡虫
- / 蜡酯合酶
- / cDNA全长基因
- / 原核表达
Abstract: [Objective] To obtain the full length cDNA sequence of the wax synthase (ws) gene of the white wax insect, Ericerus pela Chavannes, and heterologously express the enzyme in Escherichia coli. [Method] The 3' and 5' ends of the ws gene were obtained separately by using RACE, and the prokaryotic expression vector was constructed after the analysis of the full length cDNA sequence of the ws gene. Finally, the expression of WS in Ericerus coli BL21 was induced by IPTG. [Result] Sequence analysis showed that, the full-length cDNA of the ws gene was 1 518 bp, which included the 5'-UTR (untranslated region) with 94 bp, 3'-UTR with 68 bp, and the open reading frame with 1 356 bp. The gene was deduced to encode 452 amino acid residues with the putative protein molecular weight of 51.8 kDa, and the theoretical isoelectric point of 6.35. Western Blot result showed that, the WS enzyme was expressed successfully in Ericerus coli. [Conclusion] In this study, the full length cDNA of the ws gene of Ericerus pela was obtained, and this enzyme was successfully expressed in Ericerus coli, which provides references for the research on wax ester synthesis in other insects.
- Ericerus pela
- / wax synthase
- / full-length cDNA sequence
- / prokaryotic expression

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