试验于2012—2015年进行，供试品种为Den. Spring Snow，采用从高芽繁殖的2年生健壮植株，栽培管理于中国林业科学研究院科研温室内。

处理A，2012年10月15日搬入人工气候箱开始进行处理；仪器为RXM(浙江宁波产)智能气候箱，分别进行26/21℃(昼/夜温度，下同)、22/17℃、18/13℃的处理，光周期设定为光照12 h，黑暗12 h，光强320 μmol·m^-2·s^-1，空气湿度70%~80%；每个处理24盆，12月10日停止处理。从第5节叶腋处开始取芽，每7 d取样一次，每次取芽20个，取下芽体后迅速置于FAA固定液中，按常规石蜡制片，切片厚度8~10 μm，番红—固绿对染，加拿大树胶封片，Olympus BH-2型显微镜观察、拍照。

处理B，进行高温—低温—高温处理，2013年10月12日搬入人工气候箱开始进行处理，先高温26/21℃处理14 d，再转移到18/13℃，经过7、14、21、28、35 d处理，然后再转到26/21℃处理35、28、21、14、7 d，每个处理24盆。12月5日停止处理。除了试验因素外，其他管理措施相同。

处理C，进行低温—高温处理，2014年10月12日先低温18/13℃处理过7、14、21d处理，再转到26/21℃处理35、28、21 d，共处理42 d，11月23日停止处理。每个处理24盆，除了试验因素外，其他管理措施相同。

石斛兰叶腋处的休眠芽，从开始萌动到转向生殖生长，到整个花序形成，大致可划分为以下7个时期。

休眠期(Dormant phase, DP)此时芽体小，呈高圆丘状，细胞形状相似，个体较小，排列紧密，整个芽体染色均匀(图版，1)。

图      

Figure  .   

萌动期(Germination phase, GP)芽体还是呈高圆丘状，但生长锥顶端分生组织细胞排列紧密，细胞核大，染色较深，而下部的芽基组织细胞较大，核较小，排列疏松，不规则(图版，2)。

花序原基分化期(Inflorescence Primordium Differentiation Phase, IPDP)生长点先变得圆滑肥大，向上隆起，呈半球形，生长点下面的细胞大而圆，排列疏松(图版，3)。

花蕾原基分化期(Flower Differentiation Phase, SFDP)在不断膨大的生长锥下部周围隆起并逐渐分化产生1 ~ 3个椭圆形突起，即为花蕾原基。随后，中央顶端突起逐渐由圆扁变扁平，形成总状花序的顶花原基，其下部的突起形成花序中其它的侧花原基，呈椭圆形。此时，石斛兰的总状花序已现雏形(图版，4~5)。

萼片原基分化期(Sepal Differentiation Phase, SDP)花蕾原基进一步增大变宽，继而在周围产生突起(切片上为两边突起)，此突起即为萼片原基。侧蕾萼片原基生长很快，随后顶花原基也膨大变粗，顶部凹陷，其分化速度稍落后于侧蕾原基(图版，6~7)。

花瓣原基分化期(Petal Differentiation Phase, PDP)随着萼片原基的不断分化生长，在伸长的萼片原基内侧产生新的凸起，即为花瓣原基(图版，7~9)。花瓣原基分化与萼片原基分化重合，分化时间快。

合蕊柱分化期(Column Differentiation Phase, CDP)在花瓣原基继续生长发育的过程中，不断生长伸长的花瓣原基内侧又分化出新的凸起(图版，10)，分化出合蕊柱原基。此时萼片己基本形成，抱合紧密，唇瓣开始逐渐覆盖于合蕊柱之上(图版，11~12)。至此，整个花芽形态分化过程结束。

由表 1和图 1可以看出，在高温26/21℃处理条件下，从处理开始一直到处理结束，石斛兰芽体一直处于休眠芽状态，不能完成花芽分化；在22/17℃处理条件下，14 d后石斛兰芽体开始萌动，第21 d时大多数还是处于萌动期，但已经有芽体开始进入花序原基分化期，此后萼片分化期和花瓣分化期较快，基本14 d就能完成，合蕊柱分化期历时比较长，要经历14 d左右，在处理的第56 d，花芽分化完成。在18/13℃条件下，7 d后就进入萌动期，14 d后花序原基形成，此后花芽分化较快，35 d就能完成花芽分化。

图  1  不同温度处理对石斛兰花芽分化和发育的影响

Figure 1.  Effects of different temperature treatments on Den. Spring Snow flower bud differentiation and development

在高温26/21℃处理2周条件下，石斛兰花芽不能分化。从高温转到低温，接受低温18/13℃处理7 d，再接受高温处理，花芽不能完成分化，芽体分化为营养芽(图版，13~14)，最终形成高芽；经过14 d低温处理后再接受高温处理，能够完成花芽分化，而且在高温条件下花芽分化生长迅速，在第42 d时，已经可以显现完整花蕾状态；在经过低温18/13℃处理21 d、28 d、35 d后，再接受高温处理，都能够完成花芽分化，但随着低温处理的时间越长，花芽生长发育速度变缓, 在高温处理下，花芽分化和生长速度会加快(图 2)。

图  2  不同温度处理对石斛兰花芽分化和发育的影响

Figure 2.  Effects of different temperature treatments on Den. Spring Snow flower bud differentiation and development

经过低温18/13℃处理7 d，再经过高温26/21℃处理，春石斛兰不能完成花芽分化，最终形成高芽；经过低温14 d、21 d处理，再经过高温26/21℃处理，春石斛兰能够顺利完成花芽分化，最终形成花蕾。同样发现，低温处理时间越长，花芽生长发育速度变缓, 在高温处理下，花芽分化和生长速度会加快(图 3)。

图  3  不同温度处理对石斛兰花芽分化和发育的影响

Figure 3.  Effects of different temperature treatments on Den. Spring Snow flower bud differentiation and development

石斛兰的花芽分化过程与蝴蝶兰^[6]、卡特兰^[7]基本相似，都是逐步分化出花序原基、花蕾原基、萼片原基、花瓣原基，随后又因兰花其特殊的生理构造，开始其特有的繁殖器官发育过程—合蕊柱的发育，但是石斛兰与蝴蝶兰和卡特兰有一个明显的不同点，那就是存在萌动期阶段，当经历7 d的18/13℃低温处理后，芽体就处于萌动期状态，这是一个对温度高度敏感的时期，此后的温度高低决定芽体分化的走向。如果此段时间石斛兰经历18/13℃的低温诱导，能够促进花芽分化；如果此段时间石斛兰遭遇高温，则形成高芽。

有研究表明，热带兰由营养生长转向生殖生长的重要环境信号是温度^[8]，温度过低或过高都会抑制花芽的分化和发育。蝴蝶兰(Phal. hybrida)^[9-10]、卡特兰(C. hybrida)^[11-12]、大花蕙兰(Cymbidium hybridum)^[13]等热带兰需要在一定的时期内接受某种程度的低温诱导才能成花，若低温处理不足，会导致开花整齐度差，甚至不能完成花芽分化，而且花芽分化有一定的温度上限，如蝴蝶兰所在环境日温大于28℃，花芽几乎不会发生^[9]，大花蕙兰在35/25℃的温度条件下，花芽的形成受抑制^[13]，卡特兰在35/30℃的高温处理下能够延迟或抑制开花^[11-12]。本研究也表明，在高温26/21℃处理条件下，石斛兰不能完成花芽分化，22/17℃处理条件下，需要56 d才能完成花芽分化，在18/13℃条件下，35 d能够完成花芽分化，可见，石斛兰花芽分化过程持续时间和温度有关，温度低，花芽分化速度越快。

持续足够时间的低温是花芽分化的关键，石斛兰在18/13℃低温处理14 d就可以完成花芽分化的启动，花芽分化开始后，不管是经历高温还是低温，花芽分化都能够继续进行，在较高温度条件下下，花芽分化和生长速度会加快。在生产中可以利用这一特点对春石斛的花期进行调控，首先至少经历14 d的持续低温处理，再根据目标花期时间对春石斛进行高温或低温处理。

持续足够时间的低温是花芽分化的关键，萌动期是一个对温度高度敏感的时期，此时至少经历2周的低温，能够形成花芽，经历高温，则形成高芽。花芽形成后温度高有利于花芽的发育。