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森林色彩是森林景观的重要构成要素,也最能展现森林生态美学。秋色叶树种是彩叶树种最主要的类型,是实现森林景观从绿色向多彩色调转变和提高森林景观质量的重要材料。枫香(Liquidambar formosana Hance.)为金缕梅科(Hamamelidaceae)枫香属(Liquidambar L.)植物,树干高大,圆满通直,枝叶繁茂,适应性强,生长旺盛,春夏季叶色暗绿,秋季变为红色,广泛分布于我国南方各省区,是我国南方林区主要森林树种之一。枫香也可作行道树和遮阴树,或于草地孤植、丛植,或于山坡、池畔与其它树木混植,是优良的景观生态树种。枫香叶一般在每年10月下旬开始由绿变黄、变红,整个叶片衰老凋落过程持续到12月底,部分未落红叶持续到次年1月[1]。
彩叶植物秋季叶色变红是叶片中花色素苷大量合成积累的结果[2-5],其中花色素苷属于类黄酮类物质,主要存在于叶、花和果实等多种植物器官组织和细胞液泡中。同时研究表明植物叶片中叶绿素和类胡萝卜素对叶色的变化也起到重要作用[2]。近十几年来,国内学者以鲜红栎(Quercus coccinea Muench.)[2]、纳塔栎(Quercus. nuttallii Palmer.)[2]、沈氏栎(Quercus shumardii Buckl.)[2]、针栎(Quercus palustris Münchhausen.)[2]、日本野漆树(Toxicodendron succedaneum (L.) Kuntze.)[6]、红枫(Acer palmatum 'Atropurpureum' Thunb.)[7]、火炬树(Rhus Typhina Nutt.)[8-9]、红花檵木(Loropetalum chinense var. rubrum Yieh.)[10]、银杏(Ginkgo biloba L.)[8, 9]、栾树(Koelreuteria paniculata Laxm.)[9]等许多引进和本土的彩色树种为对象,对引种应用、生态适应性、呈色生理及其影响因子等作了大量研究,同时对色素合成的相关基因作了深入研究[11]。通常认为叶片呈色既受遗传因素又受环境因素的控制。然而陈秋夏等研究表明枫香叶色与遗传变异不存在显著相关[12],胡敬志等[13]的研究则表明,枫香叶片中叶绿素和类胡萝卜素含量与气温呈正相关,而花青素含量与气温表现为负相关关系。现有研究一般是对单一影响因素的探讨,综合两者对叶色变化的影响并进行比较研究则很少开展。目前,对枫香的研究也主要集中在控制条件下叶片色素含量的变化[12-14],本文尝试对不同遗传材料在不同环境条件下叶片色素含量变化及其呈色响应开展试验研究,对枫香秋叶着色遗传和环境因子的相关性进行初步探讨,进而为枫香育种和景观培育提供科学依据。
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试验所用枫香种子分别采集自湖北武汉(6号家系)、贵州惠水(10号家系)、贵州南明(14号家系)和湖南慈利(17号家系)。4个种源的地里位置由图 1所示。种子于2015年2月育苗,基质为珍珠岩∶泥炭=1∶3,采用自动喷雾浇水,待幼苗出土后,适量喷洒营养液以供给生长。2015年12月7日,选取生长一致(苗高30 cm)的无纺布容器幼苗进行试验。
试验在杭州市富阳区中国林科院亚热带林业研究所内进行,选择温度、湿度、光照等环境条件不同的4个地点布置试验,其具体情况见表 1。其中4个试验点试验期的平均温度、最低温度、最高温度、平均昼夜温差和最低湿度差异显著(p < 0.05)。
试验点
Testing point位置
Location平均温度
Average temperature /℃最低温度
Minimum temperature/℃最高温度
Maximum temperature /℃平均昼夜温差
Average range of temperature /℃平均湿度
Average humidity /%最低湿度
Minimum humidity /%最高湿度
Maximum humidity /%光照时间
Illumination time /h1 亚林所实验楼后空旷地带
Open area behind the experimental building of RISF8.2 -0.1 18.5 6.2 91 41.8 100 8 2 1号试验点旁的大棚
The greenhouse next to the No1 test point9.4 0.4 24 3.1 94.5 34.4 100 8 3 亚林所后山
Mountain behind the RISF7.2 -1.2 19.3 7.3 90.4 29.3 100 6 4 3号试验点旁的大棚
The greenhouse next to the No3 test point9.4 1.5 30.7 3.0 94.1 26.5 100 6 Table 1. Temperature, humidity and light of each test point during the experimental period
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试验采用盆栽法,每个圆形的塑料盆(直径15 cm×高15 cm)盆底设置通气孔,通气孔周围覆盖包裹有尼龙纱布的细砾石和粗砂,以防止土粒塞满砂砾空隙。装土时分层压实,并使各盆的紧实度保持一致,装土量为每盆2 kg。土体表面距盆口保持一定距离,以便浇水。供试红壤采集自富阳,取自表土层(0~30 cm)。
试验采用完全随机设计。每个试验点包含4个家系,每个家系设置3个重复,每个重复包括10株枫香幼苗,每个家系共30株苗。采样时间为2015年12月7日至28日,每7 d取样1次,共取样4次,叶片采集后进行各项参数的测定。
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在所观测的试验点,悬置DL-WS211温湿度记录仪(杭州尽享科技有限公司),仪器设置为每隔30 min自动记录1次,24 h不间断记录整个试验过程中试验点的环境温湿度。
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从每株苗同等部位同一朝向釆集2片功能叶片,每个重复共20片叶片。叶绿素含量采用丙酮法测定。擦净叶片表面污物,并剪成宽度小于1 mm细丝,称取0.2 g样品放入试管中。向试管中加入10 mL 80%丙酮混匀。试管置室温避光处浸泡24 h。将叶绿素提取液置玻璃比色皿中,80%丙酮作参比,用TU-1810型分光光度计(北京普析通用仪器公司)分别在470、645、663 nm处测定吸光度。采用Lichtenthaler等[15]的公式分别计算叶绿素a、叶绿素b及类胡萝卜素含量。
花青素含量采用1%盐酸甲醇法测定。擦净叶片表面污物,并剪成宽度小于1 mm细丝,称取0.2 g样品放入试管中。向试管中加入10 mL 1%盐酸甲醇溶液浸泡,置室温避光处浸提2 h,至肉眼观察叶组织完全变白。将花青素提取液置玻璃比色皿中,1%盐酸甲醇作参比,用TU-1810型分光光度计(北京普析通用仪器公司)分别在530 nm处测定吸光度。
可溶性糖含量采用蒽酮法测定[16]。
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采集的所有枫香叶片去离子水洗净后,用双光源扫描仪扫描,图片用WinRHIZO Pro 2005b(加拿大Regent公司)分析软件统计分析叶片变色区域面积,计算叶片变色率(叶片变色部分面积占叶片总面积的百分比)。
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试验数据采用统计软件SPSS V19.0进行方差分析和差异显著性分析。采用OriginPro 7.5软件作图,数据采用平均值±标准误。
1.1. 试验材料与试验地点
1.2. 试验方法
1.3. 试验点温湿度记录
1.4. 测定方法
1.5. 叶色面积测定
1.6. 数据分析
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在秋冬季叶片转色期,4个枫香家系叶片叶绿素含量变化趋势由图 2所示。4个家系叶片叶绿素含量在不同试验点基本呈下降趋势。叶片叶绿素含量在4个试验点差异显著(p < 0.05)。由于3号试验点在整个试验期间平均温度最低,同时其平均昼夜温差达到7.5℃, 因此枫香各家系叶片叶绿素含量在3号试验点下降幅度最大,为31.7%,显著高于其它3个试验点(p < 0.05)。4号试验点枫香家系叶绿素含量平均下降21.9%。每个试验点的家系叶绿素含量同样表现出显著差异(p < 0.05)。其中17号家系叶绿素含量在各试验点下降幅度均在40%以上,显著高于其它家系(p < 0.05)。同时6号家系叶绿素含量下降明显,平均为29.7%。而14号家系叶绿素含量下降幅度在4个试验点均小于其它3个家系。在试验期间,叶绿素a和叶绿素b具有相同的表现趋势。叶绿素含量与平均温度及平均湿度的相关性不显著(表 2)。
项目Item 叶绿素
Chlorophyll类胡萝卜素
Carotenoid花青素
Anthocyanidin可溶性糖
Soluble sugar叶片变色率
Discoloration ratio of the leaves平均温度
Average temperature平均湿度
Average humidity叶绿素Chlorophyll 1.000 类胡萝卜素Carotenoid 0.055 1.000 花青素Anthocyanidin -0.497** -0.221 1.000 可溶性糖Soluble sugar 0.009 -0.134 0.333* 1.000 叶片变色率
Discoloration ratio of the leaves-0.619** -0.230 0.635** 0.191 1.000 平均温度Average temperature -0.026 0.293* -0.532** -0.762** -0.366* 1.000 平均湿度Average humidity -0.039 0.134 -0.297* -0.143 -0.087 0.489** 1.000 注:*、**分别表示显著水平p < 0.05、p < 0.01。
Note: *, **, ***represent significant difference level p < 0.05, p < 0.01, p < 0.001, respectively.Table 2. Correlation among pigment content, soluble sugar content and environmental factors
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4个枫香家系叶片类胡萝卜素含量变化趋势由图 3所示。4个家系叶片类胡萝卜素含量在4个试验点有显著差异(p < 0.05)。相同家系类胡萝卜素含量在不同试验点的变化趋势也存在显著差异(p < 0.05),其中6号家系类胡萝卜素含量在1号试验点随着时间推移呈上升趋势,而在其它3个试验点则有相反的表现。同时不同家系类胡萝卜素含量在同一试验点的变化趋势也显著不同。其中3号试验点的4个家系叶片类胡萝卜素含量均呈下降趋势,下降幅度均在2.9%以上(p < 0.05)。类胡萝卜素含量与平均温度(Pearson r=0.293, p < 0.03, N= 48)呈显著正相关,与平均湿度呈正相关但不显著(表 2)。
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在秋冬季叶片转色期,4个枫香家系叶片花青素含量变化趋势由图 4所示。随着时间推移4个家系叶片花青素含量在4个试验点呈上升趋势并表现出显著差异(p < 0.05)。其中枫香家系花青素含量在2号试验点平均上升幅度最大,为249.8%,显著高于其它3个试验点(p < 0.05)。4号试验点枫香家系花青素含量平均上升幅度最低,为169.3%。由于1号试验点和3号试验点在试验期间平均温度较高且昼夜温差相对较小,因此4个家系花青素平均含量较其余2个试验点低。相同试验点枫香家系叶片花青素含量同样表现出显著差异(p < 0.05)。其中6号家系和17号家系花青素含量显著增加,上升幅度均在200%以上,显著高于其它家系(p < 0.05)。而14号家系花青素含量上升幅度在4个试验点均小于其它3个家系。花青素含量与叶绿素含量(Pearson r =-0.497, p < 0.01, N= 48)、平均温度(Pearson r =-0.532, p < 0.01, N= 48)呈极显著负相关,与平均湿度呈显著负相关(Pearson r =-0.297, p < 0.05, N= 48),而与可溶性糖含量呈显著正相关(Pearson r=0.333, p < 0.05, N= 48)(表 2)。
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4个枫香家系叶片可溶性糖含量变化趋势由图 5所示。试验结束后,4个家系叶片可溶性糖含量在各试验点均较试验前有不同程度增加(6号家系和10号家系在2号试验点除外)。枫香家系叶片可溶性糖含量在4个试验点的变化趋势有显著差异(p < 0.05),其中3号试验点的4个家系叶片可溶性糖含量显著增加,增加幅度均在50%以上,显著高于其它3个试验点(p < 0.05),其中17号家系叶片可溶性糖含量由6.8 mg·g-1增加到13.8 mg·g-1。可溶性糖含量与平均温度呈极显著负相关(Pearson r =-0.762, p < 0.01, N= 48),与平均湿度呈负相关但不显著(表 2)。
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试验期间枫香叶片由绿色逐渐转变为黄色或红色,4个家系叶片变色率变化趋势由图 5所示。随着时间推移,枫香叶片变色率基本呈上升趋势。试验结束后,枫香各家系叶片变色率较试验前有显著增加,但各家系的增加幅度有显著差异(p < 0.05)。试验结束后,17号家系叶片基本呈红色,甚至鲜红色;14号家系叶片则主要为黄绿色,部分为紫红色,这与叶绿素和花青素含量的变化一致。同时叶片变色率在各试验点也有显著差异(p < 0.05)。叶片变色率与叶绿素含量(Pearson r =-0.619, p < 0.01, N= 48)呈极显著负相关,与平均温度(Pearson r =-0.366, p < 0.05, N= 48)呈显著负相关,与花青素含量呈极显著正相关(Pearson r = 0.635, p < 0.01, N= 48),与可溶性糖含量呈正相关但不显著。
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表 3为家系、试验点和时间及其交互效应对枫香叶片色素、可溶性糖及叶片变色率等5个指标的三因素影响方差分析。结果显示,家系、试验点和采样时间三因素对各指标均产生极显著影响(p < 0.01)。家系、试验点和采样时间的交互效应对叶绿素和可溶性糖均没有显著影响。除类胡萝卜素外,其它4个指标均以采样时间为主要影响因素。叶绿素、花青素、叶片变色率受3因素的影响有相似趋势,均为时间>家系>试验点,其中因素间的交互效应均对花青素和叶片变色率有显著影响(p < 0.01)。可溶性糖主要受时间和试验点的影响,家系间差异小。
项目Item df 叶绿素
Chlorophyll类胡萝卜素
Carotenoid花青素
Anthocyanidin可溶性糖
Soluble sugar叶片变色率
Discoloration ratio of the leaves家系Family 3 57.619*** 54.066*** 34.284*** 4.889** 111.854*** 试验点Testing point 3 49.709*** 24.206*** 25.564*** 37.317*** 53.234*** 采样时间Sampling time 3 62.371*** 12.352*** 57.682*** 43.107*** 119.015*** 家系×试验点Family×Testing point 9 2.618** 1.793 8.243*** 0.629 11.894*** 家系×采样时间Family×Sampling time 9 4.251*** 2.984** 4.201*** 1.227 9.749*** 地点×采样时间Testing point×Sampling time 9 2.193 6.409*** 2.513* 5.663*** 4.907*** 家系×试验点×采样时间Family×Testing point×Sampling time 27 1.625 3.155*** 1.854* 1.109 7.582*** 注:*、**、***分别表示显著水平p < 0.05、p < 0.01、p < 0.001。
Note: *, **, ***represent significant difference level p < 0.05, p < 0.01, p < 0.001, respectively.Table 3. Summary of three-way ANOVA analysis of 5 indices among family, teat points, and sampling time