Analysis of Triacylglycerols in Different Oil-tea Camellia Cones

于2014年采集位于浙江省杭州市富阳区中国林科院亚热带林业研究所的6个不同油茶物种果实(表 1)，各物种选择树龄9年生的样株10株，每株随机采摘30个新果，随机采样后将样品混合均匀装于封口袋密封带回实验室，油茶果于105℃杀青，剥去果蒲，于105℃烘至恒质量，提取油脂备用。

于2014年采集位于浙江省金华市东方红林场的普通油茶长林系列果实(表 2)，各品种选择树龄9年生的样株10株，每株随机采摘30个新果，随机采样后将样品混合均匀后装于封口袋密封带回实验室，油茶果于105℃杀青，剥去果蒲，于105℃烘至恒质量，提取油脂备用。

索式提取仪(Buchi B-811，瑞士)；旋转蒸发仪(RE-52A，上海亚荣生化仪器厂)；液相色谱仪(Agilent 1200，美国)；质谱仪(Applied Biosystems 4000 Q-Trap，美国)。石油醚为分析纯，乙腈、异丙醇均为色谱纯。

含油率的测定参考GB/T 5009.6-2003。

样品前处理：取适量油样溶解在正己烷中，用乙腈/异丙醇(1/1，v/v)稀释，过0.45 μm滤膜，待测。

液相色谱条件：色谱柱：Zorbax Eclipse Plus C18柱(4.6 mm×150 mm×5 μm)。流动相A为乙腈，流动相B为异丙醇。梯度洗脱模式：0.00~20.00 min 70%~30% A；20.00~23.00 min 30%~70% A；23.00~23.10 min 30%~70% A；23.10~28.00 min 70% A；流速1 mL·min^-1；进样体积：5 μL；柱温：35℃。

质谱条件：APCI模式：正离子；气帘气(CUR)：137.9 kPa；碰撞气(CAD)：medium；雾化气流(NC)：27.38 kPa；温度(TEM)：450℃；扫描模式：EMS-EPI、MRM-EPI；扫描速度：1 000 u·s^-1；离子源气体1(GS 1)：344.75 kPa；辅助加热：开；电压(DP)：90 V；碰撞电压(CE)：35 V和55 V；碰撞电压摆幅(CES)：5 V；碰撞室输出电压(CXP)：17 V；扫描范围：500~1 100 m·z^-1。EMS扫描模式主要应用于甘油三酯的定性分析，而MRM模式主要应用于甘油三酯的定量分析。

所有数据采用Excel 2016、Minitab v16软件进行统计分析。

对6个不同油茶物种果实的含油率进行分析，结果(表 3)表明：不同油茶物种果实的含油率存在显著差异(P < 0.05)。含油率从高到低依次为浙江红花油茶、普通油茶、茶梨、腾冲红花油茶、毛蕊山茶、多齿红山茶。

对9个不同普通油茶品种长林系列果实的含油率进行分析，结果(表 4)表明：不同油茶品种果实的含油率存在显著差异(p < 0.05)。含油率均值为47.94%，其中，长林21号含油率最高，为53.50%，长林166号含油率最低，为44.25%，具有显著差异。

根据脂肪酸在甘油骨架上的分布，甘油三酯分为aaa型、aab型(aab型和aba型异构体)和abc型(a、b、c分别代表不同的脂肪酸，aaa型即表示甘油骨架上有3个相同的脂肪酸，aab型即表示有2个相同的脂肪酸，而abc型即表示3个脂肪酸均不同)。根据APCI-MS谱图中，各峰中m/z值确定该化合物的CN(酰基链总碳数)和DB(双键数)，并计算得到其ECN值(ECN=CN-2DB)。根据APCI-MS/MS谱图中的甘二酯碎片离子([DG]⁺)信息来确定可能的甘油三酯组成，从而完成对该色谱峰的鉴定。对反相C18柱而言，随着ECN值的增加，保留时间随之变长，而ECN值相同的甘油三酯则因保留时间相同而呈现共洗脱。

由典型的油茶籽油中甘油三酯HPLC-MS/MS总离子流图(图 1)可看出：各甘油三酯的分离效果良好。

Figure 1.  Total ion chromatography of TAGs of camellia seed oil

由表 5可看出：6种不同油茶物种果实共检测到24种甘油三酯，除毛蕊山茶外(未检出SSS，三硬脂酸甘油三酯)，其等价碳数(ECN)为40~54，最小的为LnLL(1-亚麻酸-2, 3-二亚油酸甘油三酯)，最大的为SSS、OSA(1-油酸-2-硬脂酸-3-花生酸甘油三脂)。

不同油茶物种果实间甘油三酯的含量存在差异。油酸作为油茶籽油中含量最高的单不饱和脂肪酸，被营养学界称为“安全脂肪酸”，能有效预防动脉粥样硬化、调节血脂、清理血栓等，其结合甘油酯化生成的油酸甘油三酯，决定着油茶籽油的品质与营养价值^[13-15]。由表 5可知：OOO(三油酸甘油三酯)的ECN为48，含量最高的为浙江红花油茶(21.18%)，明显高于其它物种果实的油茶籽油，含量最低的为腾冲红花油茶(16.01%)，与毛蕊山茶(16.09%)差异不显著；OOP(1, 2-二油酸-3-棕榈酸甘油三酯)的ECN为48，含量最高的为普通油茶(14.62%)，与浙江红花油茶(14.59%)差异不显著，含量最低的为腾冲红花油茶(11.38%)，与毛蕊山茶(11.45%)差异不显著；OOL(1, 2-二油酸-3-亚油酸甘油三酯)的ECN为46，含量最高的为浙江红花油茶(17.70%)，含量最低的为茶梨(10.80%)，腾冲红花油茶与多齿红山茶差异不显著；LLO(1, 2-二亚油酸-3-油酸甘油三酯)的ECN为44，含量最高的为毛蕊山茶(11.44%)，含量最低的为浙江红花油茶(6.48%)；SOO(1-硬脂酸-2, 3-油酸甘油三酯)的ECN为50，含量8.29%~11.23%，含量较高的为茶梨、浙江红花油茶和腾冲红花油茶，普通油茶、毛蕊山茶和多齿红山茶差异不显著。

对9个不同普通油茶品种果实甘油三酯组成进行分析(表 6)，共检测到24种甘油三酯，除长林18号外(未检出SSS)，其等价碳数(ECN)为40~54，最小的为LnLL，最大的为SSS、OSA。

不同普通油茶品种果实中甘油三酯的含量存在差异，其中，OOO的ECN为48，含量最高的为长林166号(45.83%)，与长林55号(43.19%)差异不显著，明显高于其它品种的油茶籽油，含量最低的为长林3号(17.30%)；OOL的ECN为46，含量最高的为长林18号(21.05%)，与长林4号(20.59%)差异不显著，含量最低的为长林166号(11.63%)；OOP的ECN为48，含量最高的为长林53号(16.90%)，与长林55号(16.38%)差异不显著，含量最低的为长林21号(11.63%)。

为了排除数据信息的重叠，把甘油三酯24个指标整合成几个较为重要的综合指标，即降维，将不同油茶物种果实的甘油三酯平均值进行主成分分析。依据累计贡献率大于75.00%的原则，不同油茶物种果实样品的前3个主成分因子的累计贡献率达87.99%，基本能够反应不同油茶物种果实甘油三酯的信息，其中，在第1主成分(Z1)中，PLnP(1, 3-二棕榈酸-2-亚麻酸甘油三酯)、OOL、PLP(1, 3-二棕榈酸-2-亚油酸甘油三酯)、OOO、OOP、POP(1, 3-二棕榈酸-2-油酸甘油三酯)、OOG(1, 2-二油酸-3-花生烯酸甘油三酯)、PGO(1-棕榈酸-2-花生烯酸-3-油酸甘油三酯)、POS(1-棕榈酸-2-油酸-3-硬脂酸甘油三酯)、OGG(1-油酸-2, 3-二花生烯酸甘油三酯)、SSO(1, 2-二硬脂酸-3-油酸甘油三酯)、SGP(1-硬脂酸-2-花生烯酸-3-棕榈酸甘油三酯)、OSA、SSS具有较高的载荷值；在第2主成分(Z2)中，LnLL、LLL(三亚油酸甘油三酯)、LLnP(1-亚油酸-2-亚麻酸-3-棕榈酸甘油三酯)、LLO、LLP(1, 2-二亚油酸-3-棕榈酸甘油三酯)、OLP(1-油酸-2-亚油酸-3-棕榈酸甘油三酯)、SOO、OOA(1, 2-二油酸-3-花生酸甘油三酯)具有较高的载荷值；在第3主成分(Z3)中，OLnP(1-油酸-2-亚麻酸-3-棕榈酸甘油三酯)、PGG(1-棕榈酸-2, 3-二花生烯酸甘油三酯)具有较高的载荷值。根据主成分Z1、Z2、Z3与相应的贡献率之积的和，计算不同油茶物种果实甘油三酯差异程度的综合得分(表 7)，得分越高，说明综合表现越优，6个物种中，腾冲红花油茶得分最高。综合比较表 3和表 7，不同油茶物种果实甘油三酯的综合排名与其含油率排名存在差异，腾冲红花油茶含油率排名第4，而其综合排名最高; 浙江红花油茶的含油率排名最高，且其综合排名第2。

不同普通油茶品种果实样品的前3个主成分因子累计贡献率达88.58%，基本能够反应不同普通油茶品种果实甘油三酯的信息，其中，在第1主成分(Z1)中，LLO、LLP、OLnP、PLnP、OLP、PLP、OOO、POP、PGO具有较高的载荷值；在第2主成分(Z2)中，OOL、OOP、OOG、SOO、POS、OGG、PGG、OOA、SSO、SGP具有较高的载荷值；在第3主成分(Z3)中，LnLL、LLL、LLnP、OSA、SSS具有较高的载荷值。不同普通油茶品种果实甘油三酯差异程度的综合得分(表 8)表明，9个品种中，长林3号得分最高，结合表 4可知，其含油率排名第6，而长林21号含油率最高，且综合排名第2。

对6个不同油茶物种的含油率进行分析，结果表明:不同油茶物种平均含油率为47.31%，其中，浙江红花油茶含油率最高，为61.24%，多齿红山茶含油率最低，为35.93%，有差异显著。陈炳章等^[16]对我国主要油茶物种含油率研究发现，不同油茶物种间含油量的差异相当大，可达2~3倍，说明我国油茶物种中油脂含量具有丰富的多样性。朱勇等^[17]认为，不同物种油茶的含油率与其分布纬度无相关性，因此认为含油率不同主要是由物种本身差异引起。对9个不同普通油茶品种的含油率进行分析，结果表明:9个普通油茶品种的含油率介于41.93%~53.50%，与文献报道的测定值^[18]范围接近。

对6种不同油茶物种进行甘油三酯定性分析，共检测到24种甘油三酯，主要为不饱和甘油三酯，即OOO、OOL、OOP、LLO、SOO，与文献报道^[19]基本一致，说明油茶籽油是一种凝固点低、不饱和脂肪含量高且具有较好营养价值的食用油。5种主要不饱和甘油三脂的平均含量由高到低依次是的OOO(17.94%)、OOL(14.25%)、OOP(12.74%)、LLO(9.70%)、SOO(9.01%)。姚小华等研究发现，油茶籽油的脂肪酸组成与其生长环境有一定相关性^[20]。6个不同物种按其经度由高到低排列依次为浙江红花油茶、茶梨、普通油茶、多齿红山茶、毛蕊山茶、腾冲红花油茶。比较各物种OOO、OOP、OOL含量可以发现，其含量由高到低的排列顺序与其经度排列基本一致，油茶籽油中甘油三酯的含量与其生长环境也有一定的相关性.杨柳等^[21]从营养成分角度分析浙江红花油茶并说明其营养价值较高，作者研究发现，浙江红花油茶中3种甘油三酯(OOO、OOP、OOL)的含量均最高，这可能是浙江红花油茶果实的营养价值优于其它物种果实的原因，由此可见，对9个不同普通油茶品种甘油三酯进行定性分析，共检测到24种甘油三酯，主要为不饱和甘油三酯，即OOO、OOL、OOP, 其平均含量由高到低依次是OOO(33.88%)、OOL(16.80%)、OOP(14.61%)，含量均超过10.00%。此外，长林3号、21号、23号、166号中SOO含量超过10.00%，分别为11.55%、10.17%、15.24%、10.93%。不同普通油茶品种间甘油三酯含量存在一定差异，可能与遗传因素、生长条件有关。

对6个不同油茶物种和9个不同普通油茶品种果实甘油三酯进行主成分分析，结果表明，不同油茶物种和普通油茶品种果实甘油三酯的综合排名与其含油率排名均存在差异。不同油茶物种果实中，腾冲红花油茶得分最高，其含油率排名第4，而浙江红花油茶的含油率排名最高，且其综合排名第2；不同普通油茶品种果实中，长林3号得分最高，其含油率排名第6，而长林21号含油率最高，且综合排名第2。

目前，我国尚未颁布食用植物油甘油三酯的分析标准，且国内外对油茶籽油中甘油三酯的研究较少。本文采用HPLC-MS、主成分分析方法对不同油茶物种及品种果实中甘油三酯进行研究，结果表明，不同物种及品种果实中甘油三酯主要为OOO(三油酸甘油三酯)、OOL(1, 2-二油酸-3-亚油酸甘油三酯)、OOP(1, 2-二油酸-3-棕榈酸甘油三酯)等不饱和甘油三酯，平均含量均超过10.00%。结合含油率与甘油三酯主成分分析结果得出，不同油茶物种果实中，浙江红花油茶表现较优，不同普通油茶品种果实中，长林21号表现较优。研究结果为油茶籽油指纹图谱构建提供了定性依据，可用于有关制剂质量标准的制定，同时为油茶籽油营养价值评价、品质鉴定提供了科学依据。