• 中国中文核心期刊
  • 中国科学引文数据库(CSCD)核心库来源期刊
  • 中国科技论文统计源期刊(CJCR)
  • 第二届国家期刊奖提名奖
Volume 31 Issue 3
Jul.  2019
Article Contents
Turn off MathJax

Citation:

Identification and Phylogenetic Position of Pagiophloeus tsushimanus Based on COI and rDNA Sequences

  • Objective To analyze the phylogenetic position and genetic evolution of Pagiophloeus tsushimanus. Method Four DNA sequence fragments: cytochrome oxidase subunitⅠ(COI) gene of mitochondrial DNA (mtDNA), V4 and V7 region of 18S ribosomal DNA (18S rDNA) and D2 region of 28S ribosomal DNA (28S rDNA) were amplified. Maximum likelihood (ML) and neighbor jointing (NJ) methods were used to build up phylogenetic trees of P. tsushimanus and related species in Curculionidae, so as to study the classification status of P. tsushimanus. Result Analysis on COI and rDNA suggested that P. tsushimanus belongs to Hylobiini of Molytinae. Conclusion According to the analysis, the results of 28S rDNA support the morphological classification of P. tsushimanus.
  • 加载中
  • [1] 李巧.中国象甲科分类研究综述[J].西南林学院学报, 2003, 23(3):74-79.

    [2] 赵艳, 高晓余, 肖春.象甲科昆虫寄主选择行为研究进展[J].农业灾害研究, 2014, 4(7):8-21, 46.

    [3] 黄俊浩, 吴时英, 高磊, 等.中国新记录种——香樟齿喙象的鉴别与为害[J].浙江农林大学学报, 2014, 31(5):764-767.

    [4]

    Alonsozarazaga M A, Lyal C H C. A world catalogue of families and genera of Curculionoidea (Insecta:Coleoptera) (Excepting Scolytidae and Platypodidae)[M]. Barcelona Entomopraxis, 1999:202.
    [5]

    Faust J. Curculionidenaus dem Malayischen Archipel[J]. Stettiner Entomologische Zeitung, 1892, 53(7/9):184-228.
    [6]

    Hebert P D N, Cywinska A, Ball S L, et al. Biological identifications through DNA barcodes[J]. Proceedings Biological Sciences, 2003, 270(1512):313-321. doi: 10.1098/rspb.2002.2218
    [7]

    Hebert P D, Ratnasingham S, Dewaard J R. Barcoding animal life:cytochrome c oxidase subunit 1 divergences among closely related species[J]. Proceedings of the Royal Society Biological Sciences, 2003, 270(Suppl-1):S96-S99.
    [8] 魏子涵, 尹新明, 安世恒, 等.利用分子标记18S rDNA对天牛高阶元进化关系的研究[J].应用昆虫学报, 2014, 51(02):425-439.

    [9]

    Marvaldi A E. Higher level phylogeny of Curculionidae (Coleoptera:Curculionoidea) based mainly on larval characters, with special reference to broad-nosed weevils[J]. Cladistics, 1997, 13(4):285-312. doi: 10.1111/j.1096-0031.1997.tb00321.x
    [10]

    Marvaldi A E, Morrone J J. Phylogenetic systematics of weevils (Coleoptera:Curculionoidea):A reappraisal based on larval and adult morphology[J]. Insect Systematics and Evolution, 2000, 31(1):43-58. doi: 10.1163/187631200X00309
    [11]

    Marvaldi A E, Sequeira A S, O'Brien C W, et al. Molecular and morphological phylogenetics of weevils (Coleoptera, Curculionoidea):do niche shifts accompany diversification?[J]. Systematic Biology, 2002, 51(5):761-785. doi: 10.1080/10635150290102465
    [12] 黄华平, 杨腊英, 王国芬, 等. rDNA和mtDNA在昆虫系统发育与区系研究中的应用[J].热带生物学报, 2006, 12(4):45-49. doi: 10.3969/j.issn.1674-7054.2006.04.010

    [13] 张健, 李晓强, 刘斐, 等.基于线粒体16S rDNA基因的天牛科部分种类分子系统学研究(鞘翅目:天牛科)[J].昆虫分类学报, 2010(S1):1-7.

    [14] 张健, 张晓军, 任炳忠.基于28S rDNA基因的天牛科部分种类的分子系统发育[J].林业科学, 2012, 48(10):86-94. doi: 10.11707/j.1001-7488.20121014

    [15] 王志良, 张润志.小蠹亚科的分类地位(鞘翅目, 象虫科)[J].动物分类学报, 2012, 37(2):291-295.

    [16] 栾丰刚, 丁俊杰, 何龙喜, 等.以线粒体COⅠ基因探讨萧氏松茎象的分类地位[J].江西农业大学学报, 2013, 35(5):906-913. doi: 10.3969/j.issn.1000-2286.2013.05.002

    [17]

    Loxdale H D, Lushai G. Molecular markers in entomology[J]. Bulletin of Entomological Research, 1998, 88(06):577-600. doi: 10.1017/S0007485300054250
    [18]

    Raupach M J, Astrin J J, Hannig K, et al. Molecular species identification of Central European ground beetles (Coleoptera:Carabidae) using nuclear rDNA expansion segments and DNA barcodes[J]. Frontiers in Zoology, 2010, 7(1):26. doi: 10.1186/1742-9994-7-26
    [19]

    Gillespie J J, Kjer K M, Duckett C N, et al. Convergent evolution of cucurbitacin feeding in spatially isolated rootworm taxa (Coleoptera:Chrysomelidae; Galerucinae, Luperini)[J]. Molecular Phylogenetics and Evolution, 2003, 29(1):161-175. doi: 10.1016/S1055-7903(03)00256-2
    [20]

    Tamura K, Peterson D, Peterson N, et al. MEGA5:molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood, evolutionary distance, and maximum parsimony methods[J]. Molecular Biology and Evolution, 2011, 28(10):2731-2739. doi: 10.1093/molbev/msr121
    [21]

    Parchman T L, Geist K S, Grahnen J A, et al. Transcriptome sequencing in an ecologically important tree species:assembly, annotation, and marker discovery[J]. BMC Genomics, 2010, 11(1):180. doi: 10.1186/1471-2164-11-180
    [22]

    Rota-Stabelli O, Telford M J. A multi criterion approach for the selection of optimal outgroups in phylogeny:Recovering some support for Mandibulata over Myriochelata using mitogenomics[J]. Molecular Phylogenetics and Evolution, 2008, 48(1):103-111. doi: 10.1016/j.ympev.2008.03.033
    [23]

    Chenna R, Sugawara H, Koike T, et al. Multiple sequence alignment with the clustal series of programs[J]. Nucleic Acids Research, 2003, 31(13):3497-3500. doi: 10.1093/nar/gkg500
    [24] 常虹, 郝德君, 肖荣堂, 等.基于线粒体COⅠ基因的齿小蠹属昆虫DNA条形码研究[J].昆虫学报, 2012, 55(9):1075-1081.

    [25] 聂瑞娥, 杨星科.鞘翅目昆虫线粒体基因组研究进展[J].昆虫学报, 2014, 57(7):860-868.

    [26] 贾晨曦.我国北方金龟科甲虫分子标记和系统发育研究[D].沈阳, 沈阳大学, 2014.

    [27]

    Geiser M F, Hagmann R, Nagel P, et al. A first broad-scale molecular phylogeny of Prionoceridae (Coleoptera:Cleroidea) provides insight into taxonomy, biogeography and life history evolution[J]. Arthropod Systematics & Phylogeny, 2016, 74(1).
    [28]

    Lorenz J G, Jackson W E, Hanner R. The problems and promise of DNA barcodes for species diagnosis of primate biomaterials[J]. Philosophical Transactions of the Royal Society B Biological Sciences, 2005, 360(1462):1869-1877. doi: 10.1098/rstb.2005.1718
    [29]

    Xie L, Miao H, Hong X Y. The Two-spotted spider mite Tetranychus urticae Koch and the carmine spider mite Tetranychus cinnabarinus (Boisduval) in China mixed in their Wolbachia phylogenetic tree[J]. Zootaxa, 2006, 1165:3346.
    [30] 杨瑞生, 钟亮, 姜义仁, 等.橡实象虫等25种昆虫线粒体COI基因的遗传多样性及系统进化分析[J].蚕业科学, 2011, 37(06):985-992. doi: 10.3969/j.issn.0257-4799.2011.06.003

    [31] 孙田依.锈赤扁谷盗和土耳其扁谷盗线粒体基因组特征及系统发育研究[D].江西, 南昌大学, 2016.

  • 加载中
通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com
  • 1. 

    沈阳化工大学材料科学与工程学院 沈阳 110142

  1. 本站搜索
  2. 百度学术搜索
  3. 万方数据库搜索
  4. CNKI搜索

Figures(3) / Tables(5)

Article views(4092) PDF downloads(36) Cited by()

Proportional views

Identification and Phylogenetic Position of Pagiophloeus tsushimanus Based on COI and rDNA Sequences

    Corresponding author: HAO De-jun, djhao@njfu.edu.cn
  • 1. Co-Innovation Center for the Sustainable Forestry in Southern China, College of Forestry, Nanjing Forestry University, Nanjing 210037, Jiangsu, China
  • 2. Forest Station of Songjiang District, Shanghai 201600, China
  • 3. Forest Station of Shanghai, Shanghai 200072, China

Abstract:  Objective To analyze the phylogenetic position and genetic evolution of Pagiophloeus tsushimanus. Method Four DNA sequence fragments: cytochrome oxidase subunitⅠ(COI) gene of mitochondrial DNA (mtDNA), V4 and V7 region of 18S ribosomal DNA (18S rDNA) and D2 region of 28S ribosomal DNA (28S rDNA) were amplified. Maximum likelihood (ML) and neighbor jointing (NJ) methods were used to build up phylogenetic trees of P. tsushimanus and related species in Curculionidae, so as to study the classification status of P. tsushimanus. Result Analysis on COI and rDNA suggested that P. tsushimanus belongs to Hylobiini of Molytinae. Conclusion According to the analysis, the results of 28S rDNA support the morphological classification of P. tsushimanus.

  • 象甲科Curculionidae在鞘翅目昆虫中种间变异程度极其复杂,不同地区受到环境、植被等因子的影响往往出现与各区系生态环境相适应的象虫种类[1]。象甲科昆虫均为植食性害虫,幼虫和成虫对寄主植物的根、茎、叶、花、果、种子、幼芽和嫩梢等部位均有不同程度的危害,其中幼虫阶段长期蛀食植物内部,破坏输导组织,危害最为严重[2]。香樟齿喙象(Pagiophloeus tsushimanus)隶属鞘翅目Coleoptera象甲科Curculionidae魔喙象亚科Molytinae树皮象族Hylobiini齿喙象属Pagiophloeus[3-4],是一种重要的钻蛀性害虫。分布于我国(上海和福建)和日本,2014年首次报道其在上海危害香樟(Cinnamomum camphora(L.)Presl),且被鉴定为中国新记录种[3]。以幼虫钻蛀香樟主干和侧枝的韧皮部和木质部,常常导致树势衰弱,生长不良,易受其他病虫害的侵害[5]

    随着分子系统学研究的逐步深入,通过分子生物信息学对物种分类地位进行鉴定的分析技术日趋成熟。分子系统学的研究主要是依据DNA和蛋白质序列,其主要原理是通过分子遗传标记,将各物种进行系统分析,以此探讨各物种在遗传进化中的分类地位。常用的分子标记主要有进化速率快,具有母系遗传,几乎不发生重组的核外线粒体DNA中细胞色素氧化酶第亚基(Ctyochrome oxidase subunit Ⅰ)[6-7],以及进化速率较慢,各区保守性不同的核内核糖体DNA(Ribosomal DNA, rDNA)[8]。但是无论是以线粒体基因还是核基因作为标记,都有各自的优缺点,不能全面反映物种间的真实进化关系,因此联合基因的应用已成为研究昆虫分子系统发育学领域的一种发展趋势。COⅠ基因与rDNA基因的进化速率不同,适用于不同的分类阶元,因此可以相互弥补和验证,从而更全面、准确的反映系统发育关系。Malvadi利用18S rDNA构建了象虫总科Curculionoidea的系统发育树,并提出18S rDNA的部分序列适用于科级以上阶元的分类[9-11]。黄华平等根据国内外研究结果对常用的几种分子标记的特点、适用范围进行了总结[12]。张健等分别用线粒体16S rDNA和核糖体28S rDNA为分子标记对天牛亚科Cerambycinae间系统发育关系做了系统研究,分析了天牛亚科Cerambycinae的进化关系[13-14]。近几年,国内利用分子生物学对部分象甲科昆虫的系统进化分析也取得了一定成果,王志良和张润志曾结合已有研究,通过传统形态学结合分子生物学方法,综合比较小蠹亚科Scolytinae分类地位,认同小蠹亚科是象甲科的一个亚科的结论[15]。栾丰刚等通过对COⅠ基因标记分析萧氏松茎象(Hylobitelus xiaoi)的分类地位,为萧氏松茎象的鉴定提供了可靠的分子生物学依据[16]

    本研究通过对香樟齿喙象成虫的线粒体COⅠ基因和核糖体18S rDNA、28S rDNA进行测序分析,与GenBank已有的象甲科昆虫的相关基因序列比对,探讨研究香樟齿喙象在象甲总科中的系统进化关系,为分子鉴定、生物学、生态学及防治技术等研究提供参考依据。

1.   材料与方法
  • 供试昆虫:香樟齿喙象(P. tsushimanus)的成虫采自上海市松江区泖冈镇香樟(C. camphora(L.)Presl)人工林,将采集的成虫置于100%的乙醇溶液中,带回室内于-20℃冰箱保存备用。

    主要试剂:DNA提取试剂购自生工生物工程(上海)股份有限公司,DNA聚合酶、琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒购自宝生物工程(大连)有限公司,基因克隆相关试剂盒购自北京全式金生物技术有限公司。

  • 采用磁珠法提取基因组DNA:取虫体约30 g,用双蒸水冲洗去除残留乙醇后,将组织进行研磨,加入适量的裂解液及蛋白酶K,随后根据基因组提取试剂盒(上海生工)进行操作,利用Nano Drop 1 000紫外分光光度计(Thermo Scientific,America)和琼脂糖凝胶电泳对所抽提出的总DNA进行浓度和纯度(OD260/280)检测,检测合格的DNA置于-20℃保存备用。

  • COⅠ引物参照Loxdale等[17]合成:C1-J-1718(5′-GGAGGATTTGGAAATTGATTGTTCC-3′)和C1-N-2191(5′-CCCGGTAAAATTAAAATATAAACTTC-3′);18S rDNA V4区和V7区的扩增引物片段参照Raupach等[18]:CV4F(5′-TGGTGCCAGCAGCCGCGGTAA-3′)和CV4R(5′-CCTCTAACGTCGCAATACGAATGCCC-3′),CV7F(5′-CTTAAAGGAATTGACGGAGGGCACCACC-3′)和CV7R(5′-GATTCCTTCAGTGTAGCGCGCGTG-3′)及28S rDNA D2区基因序列的引物参照Gillespie等[19]:D2F(5′-GGACCCGTCTTGAAACAC-3′)和D2R(5′-GCATAGTTCACCATCTTTC-3′)。

  • PCR反应体系含10×PCR Buffer 5.0 μL、dNTP 4.0 μL、DNA模板1.0 μL、Taq酶0.5 μL、上下游引物各1 μL、无菌水补至50 μL。PCR条件为:95℃预变性5 min,94℃变性30 s,50℃退火1 min,72℃延伸90 s,循环35次,72℃充分延伸7 min。将PCR扩增产物于2%的琼脂糖凝胶电泳上检测并回收,回收产物与pEASY®-T1载体连接,转化大肠杆菌Trans1-T1,涂布过夜培养后筛选出阳性克隆,送至上海杰李生物技术有限公司测序。

  • 利用软件MEGA 5.1[20]和SeqMan[21],进行序列的拼接与比对,确保获得目的基因片段。拼接好的序列提交NCBI(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/)进行同源性比对,防止外源基因的污染,并获得近缘种的COⅠ和rDNA基因序列(表 1)。并选取鞘翅目中与象甲科亲缘关系较为接近的种作为外种群,以避免构建进化树时产生长枝吸引现象[22]。将所得序列载入软件Clustal X 1.83[23]进行比对,比对结果导入MEGA 5.1[20],计算序列间的遗传距离并进行碱基替换饱和度分析。分别采用最大似然法(maximum likelihood,ML)和邻接法(neighbor joining,NJ)构建系统发育树。

    科/亚科
    family/subfamily
    COⅠ种
    species
    登录号
    accession number
    科/亚科
    family/subfamily
    18S rDNAV4
    种species
    登录号
    accession number
    Cryptorhynchinae Kyklioacalles provincialis GU987894.1 Curculioninae Eusomus ovulum JN619090.1
    Magdalinae Magdalis ruficornis KJ962562.1 Curculioninae Acalles ptinoides AJ850002.1
    Ceutorhynchinae Ceutorhynchus gallorhenanus DQ058700.1 Curculioninae Cleopomiarus meridionalis JX091170.1
    Entiminae Naupactus ambiguus AY790879.1 Molytinae Calvertius tuberosus AF389070.1
    Baridinae Baris picicornis KM439312.1 Entiminae Polydrusus sericeus AF250086.2
    Ceutorhynchinae Ceutorhynchus rapae DQ058702.1 Molytinae Tranes lyterioides KP419321.1
    Ceutorhynchinae Ceutorhynchus erysimi DQ058698.1 Molytinae Sympiezoscelus spencei KP419304.1
    Scolytinae Xylocleptes adeniae JX263819.1 Scolytinae Ips lecontei KJ531085.1
    Entiminae Galapaganus ashlocki AF211488.1 Scolytinae Ips pini KJ531081.1
    Baridinae Brachypera zoilus KM447815.1 Scolytinae Ips typographus KJ531078.1
    Hyperinae Hypera postica KU188400.1 Cyclominae Talaurinus subvittatus AF389054.1
    Hyperinae Hypera diversipunctata KR487166.1 Scolytinae Pityokteines minutus AF308342.1
    Molytinae Hylobitelus xiaoi KC476444.1 Curculioninae Rhinusa bipustulata JX091146.1
    Molytinae Hylobius abietis EF450122.1 Curculioninae Rhinusa neta JX091122.1
    Cerambycidae Desisa variabilis FJ559008.1 Entiminae Barypeithes pellucidus JN619047.1
    Scolytinae Hylesinus varius KC845462.1 Lamiinea Anoplophora-glabripennis KF142077.1
    Lepturinae Nanostrangalia chujoi FJ559029.1 Lamiinea Anoplophora chinensis KF141949.1
    Entiminae Naupactus dissimulator JX440497.1 Lamiinea Monochamus alternatus KF141961.1
    Ceutorhynchinae Ceutorhynchus fallax DQ058699.1 Entiminae Pachylobius picivorus AF250103.2
    科/亚科
    family/subfamily
    18S rDNAV7
    种species
    登录号
    accession number
    科/亚科
    family/subfamily
    28S rDNAD2
    种species
    登录号
    accession number
    Cryptorhynchinae Acalles ptinoides AJ850002.1 Entiminae Trichalophus caudiculatus KU748546.1
    Hyperinae Hypera postica JX239438.1 Curculionidae Aesiotes notabilis FJ867654.1
    Entiminae Sciaphilus asperatus JN619105.1 Scolytinae Ambrosiodmus aegir FJ867655.1
    Magdalinae Magdalis barbicornis JN619019.1 Brentidae Aporhina australis FJ867657.1
    Cryptorhynchinae Bepharus ellipticus FJ867740.1 Cossoninae Araucarietius viridans FJ867658.1
    Entiminae Meira crassicornis DQ337113.1 Curculioninae Curculio niveopictus FJ867675.1
    Chrysomelidae Lilioceris merdigera AJ841445.1 Curculioninae Eisingius chusqueae FJ867680.1
    Curculioninae Gymnetron antirhini AJ850004.1 Curculionidae Gymnetron tetrum FJ867684.1
    Entiminae Sitona striatellus AJ849997.1 Curculioninae Myrmex floridanus FJ867694.1
    Curculionidae Chrysolopus spectabilis FJ867745.1 Entiminae Sitona hispidulus FJ867710.1
    Chrysomelidae Aulacoscelis appendiculata AJ841524.1 Molytinae Hylobius piceus HQ883576.1
    Curculioninae Curculio glandium KP419065.1 Molytinae Hylobius abietis JN544547.1
    Ceutorhynchinae Ceutorhynchus scrobicollis JX091171.1 Curculioninae Curculio lateritius AB573462.1
    Curculionidae Philopedon plagiatum JN619148.1 Scolytinae Pityokteines curvidens KJ531136.1
    Cossoninae Araucarius minor AF308304.1 Brachyceridae Notaris acridulus KP419545.1
    Curculionidae Hypera nigrirostris AJ850005.1 Molytinae Tranes lyterioides KP419676.1
    Lamiinea Anoplophora chinensis KF142013.1 Lamiinea Anoplophora glabripennis KF142077.1
    Lamiinea Anoplophora glabripennis KF142012.1 Lamiinea Anoplophora chinensis KF142078.1
    Lamiinea Monochamus alternatus KF142025.1 Lamiinea Monochamus alternatus KF142090.1

    Table 1.  GenBank accession numbers of COⅠ, 18S rDNA (V4 and V7), 28S rDNA (D2) sequences used in phylogenetic tree

2.   结果与分析
  • PCR电泳结果如图 1所示,用4对引物扩增后均获得单一条带,对扩增产物进行克隆和测序,结果为:COⅠ片段长523 bp,18S rDNA的V4和V7区分别为387 bp、352 bp,28S rDNA D2区序列长447 bp。

    Figure 1.  The electrophoresis result of PCR product

    利用MEGA 5.1进行比对与序列分析,比对筛选到的(COⅠ 20种、18S rDNA V4区20种及V7区20种、28S rDNA D2区20种)共涉及到鞘翅目象甲科(包括外缘3个科)16个亚科,24个属,70种,删除进化速度快的序用于序列分析,COⅠ序列碱基A、T(U)、C、G的平均含量分别为30.68%、36.08%、14.98%和18.26%。系统发育除28S rDNA外均无碱基插入或缺失现象。COⅠ的444个核苷酸中变异位点209个,占全部位点的47.1%,简约信息位点178个,占全部位点的40.1%。最大似然法估计转换(Transition)/颠换(Transversion)的R值为0.832,转换小于颠换;18S rDNA V4和V7区碱基A、T(U)、C、G的平均含量分别为21.75%、27.41%、28.72%、22.12%和20.45%、26.73%、29.45%、23.72%。18SrDNA V4和V7区系统发育分析的位点分别为340和351,变异位点分别为18个和21,分别占全部位点的5.3%和6.0%,简约信息位点15和14个,分别占全部位点的4.4%和4.0%。最大似然法估计转换(transition)/颠换(transversion)的R值为6.75和2.86,转换大于颠换;28SrDNAD2区碱基A、T(U)、C、G的平均含量分别为15.64%、22.25%、32.68%、29.43%。28S rDNA D2区系统发育分析的位点为461,变异位点为182个,占全部位点的39.5%,简约信息位点125个,占全部位点的27.1%。最大似然法估计转换/颠换的R值为1.723,转换大于颠换。

  • 用MEGA5.1计算获得香樟齿喙象COⅠ序列和其他象甲科昆虫及外种群的非校正P距离(见表 2~5),得到香樟齿喙象与欧洲松树皮象Hylobius abietisKyklioacalles provincialis遗传距离最为接近均为0.151。其次与Naupactus ambiguus的遗传距离为0.153。

    1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
    1 0.016 0.016 0.018 0.017 0.016 0.017 0.018 0.017 0.017 0.019 0.018 0.018 0.017 0.018 0.017 0.017 0.018 0.017 0.020
    2 0.151 0.015 0.018 0.017 0.016 0.018 0.017 0.017 0.017 0.018 0.018 0.018 0.017 0.019 0.016 0.017 0.017 0.017 0.018
    3 0.153 0.153 0.019 0.018 0.017 0.019 0.017 0.017 0.017 0.019 0.018 0.017 0.017 0.018 0.018 0.018 0.018 0.017 0.020
    4 0.182 0.194 0.200 0.018 0.018 0.015 0.019 0.019 0.019 0.013 0.017 0.019 0.019 0.019 0.018 0.018 0.018 0.018 0.019
    5 0.153 0.185 0.182 0.191 0.018 0.019 0.019 0.018 0.017 0.019 0.018 0.019 0.017 0.019 0.019 0.018 0.018 0.019 0.020
    6 0.158 0.160 0.185 0.205 0.207 0.019 0.016 0.017 0.018 0.018 0.019 0.018 0.017 0.017 0.018 0.018 0.018 0.017 0.019
    7 0.189 0.196 0.196 0.133 0.200 0.205 0.019 0.018 0.019 0.016 0.016 0.018 0.018 0.018 0.017 0.017 0.017 0.018 0.019
    8 0.171 0.185 0.162 0.200 0.207 0.164 0.200 0.018 0.018 0.018 0.019 0.016 0.018 0.018 0.018 0.019 0.019 0.018 0.019
    9 0.167 0.185 0.178 0.200 0.194 0.176 0.205 0.198 0.018 0.018 0.018 0.018 0.018 0.019 0.018 0.018 0.018 0.018 0.018
    10 0.167 0.191 0.178 0.196 0.153 0.187 0.214 0.185 0.203 0.019 0.019 0.019 0.017 0.018 0.017 0.018 0.018 0.017 0.019
    11 0.194 0.209 0.212 0.077 0.198 0.207 0.151 0.194 0.191 0.203 0.017 0.018 0.018 0.019 0.018 0.018 0.018 0.018 0.019
    12 0.196 0.178 0.185 0.144 0.198 0.209 0.149 0.196 0.176 0.203 0.158 0.019 0.019 0.018 0.018 0.018 0.019 0.019 0.019
    13 0.178 0.205 0.185 0.212 0.200 0.180 0.212 0.149 0.194 0.214 0.212 0.198 0.018 0.018 0.019 0.019 0.018 0.018 0.020
    14 0.187 0.200 0.182 0.203 0.169 0.200 0.194 0.185 0.178 0.162 0.198 0.207 0.189 0.017 0.018 0.018 0.017 0.017 0.019
    15 0.176 0.203 0.196 0.196 0.194 0.182 0.189 0.178 0.218 0.189 0.209 0.180 0.191 0.178 0.015 0.015 0.018 0.017 0.019
    16 0.173 0.151 0.182 0.205 0.189 0.185 0.203 0.189 0.203 0.178 0.214 0.182 0.214 0.180 0.122 0.007 0.019 0.017 0.019
    17 0.169 0.149 0.187 0.198 0.185 0.182 0.200 0.191 0.209 0.189 0.214 0.187 0.207 0.180 0.128 0.027 0.018 0.018 0.020
    18 0.182 0.160 0.200 0.216 0.200 0.187 0.203 0.207 0.198 0.198 0.225 0.200 0.200 0.180 0.191 0.189 0.185 0.014 0.019
    19 0.151 0.155 0.160 0.203 0.210 0.169 0.194 0.185 0.185 0.176 0.216 0.185 0.185 0.171 0.180 0.173 0.178 0.097 0.018
    20 0.227 0.221 0.236 0.234 0.223 0.212 0.225 0.200 0.169 0.232 0.230 0.218 0.221 0.203 0.207 0.216 0.225 0.216 0.194
    1 (Pagiophloeus tsushimanus); 2 (Kyklioacalles provincialis); 3 (Magdalis ruficornis); 4 (Ceutorhynchus gallorhenanus); 5 (Naupactus ambiguus); 6 (Baris picicornis); 7 (Ceutorhynchus rapae); 8 (Hylesinus varius); 9 (Nanostrangalia chujoi); 10 (Naupactus dissimulator); 11 (Ceutorhynchus fallax); 12 (Ceutorhynchus erysimi); 13 (Xylocleptes adeniae); 14 (Galapaganus ashlocki); 15 (Brachypera zoilus); 16 (Hypera postica); 17 (Hypera diversipunctata); 18 (Hylobitelus xiaoi); 19 (Hylobius abietis); 20 (Desisa variabilis).

    Table 2.  p-Distance of COⅠ gene in 20 specie (lower triangle) and standard errors (up triangle)

    1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
    1 0.004 0.006 0.006 0.006 0.006 0.006 0.007 0.007 0.007 0.007 0.007 0.007 0.007 0.007 0.007 0.007 0.011 0.011 0.011
    2 0.006 0.004 0.004 0.005 0.005 0.006 0.006 0.006 0.006 0.006 0.006 0.007 0.006 0.006 0.006 0.007 0.010 0.010 0.010
    3 0.012 0.006 0.000 0.003 0.003 0.004 0.004 0.004 0.004 0.004 0.004 0.005 0.004 0.005 0.005 0.006 0.009 0.009 0.009
    4 0.012 0.006 0.000 0.003 0.003 0.004 0.004 0.004 0.004 0.004 0.004 0.005 0.004 0.005 0.005 0.006 0.009 0.009 0.009
    5 0.015 0.009 0.003 0.003 0.004 0.005 0.005 0.005 0.003 0.003 0.003 0.005 0.005 0.004 0.004 0.006 0.009 0.009 0.009
    6 0.015 0.009 0.003 0.003 0.006 0.005 0.003 0.003 0.003 0.003 0.003 0.006 0.005 0.004 0.004 0.005 0.008 0.008 0.008
    7 0.012 0.012 0.006 0.006 0.009 0.009 0.005 0.006 0.006 0.006 0.006 0.006 0.006 0.006 0.006 0.006 0.010 0.010 0.010
    8 0.018 0.012 0.006 0.006 0.009 0.003 0.012 0.004 0.004 0.004 0.004 0.006 0.005 0.005 0.005 0.006 0.008 0.008 0.008
    9 0.018 0.012 0.006 0.006 0.009 0.003 0.012 0.006 0.004 0.004 0.004 0.005 0.006 0.005 0.005 0.005 0.008 0.008 0.008
    10 0.018 0.012 0.006 0.006 0.003 0.003 0.012 0.006 0.006 0.000 0.000 0.006 0.005 0.003 0.003 0.005 0.008 0.008 0.008
    11 0.018 0.012 0.006 0.006 0.003 0.003 0.012 0.006 0.006 0.000 0.000 0.006 0.005 0.003 0.003 0.005 0.008 0.008 0.008
    12 0.018 0.012 0.006 0.006 0.003 0.003 0.012 0.006 0.006 0.000 0.000 0.006 0.005 0.003 0.003 0.005 0.008 0.008 0.008
    13 0.018 0.018 0.012 0.012 0.009 0.015 0.012 0.018 0.012 0.012 0.012 0.012 0.007 0.005 0.005 0.003 0.009 0.009 0.009
    14 0.018 0.012 0.006 0.006 0.009 0.009 0.012 0.012 0.012 0.012 0.012 0.012 0.018 0.006 0.006 0.007 0.008 0.008 0.008
    15 0.021 0.015 0.009 0.009 0.006 0.006 0.015 0.009 0.009 0.003 0.003 0.003 0.009 0.015 0.000 0.004 0.009 0.009 0.009
    16 0.021 0.015 0.009 0.009 0.006 0.006 0.015 0.009 0.009 0.003 0.003 0.003 0.009 0.015 0.000 0.004 0.009 0.009 0.009
    17 0.021 0.021 0.015 0.015 0.012 0.012 0.015 0.015 0.009 0.009 0.009 0.009 0.003 0.021 0.006 0.006 0.009 0.009 0.009
    18 0.041 0.035 0.029 0.029 0.032 0.026 0.035 0.029 0.024 0.029 0.029 0.029 0.035 0.024 0.032 0.032 0.032 0.000 0.000
    19 0.041 0.035 0.029 0.029 0.032 0.026 0.035 0.029 0.024 0.029 0.029 0.029 0.035 0.024 0.032 0.032 0.032 0.000 0.000
    20 0.041 0.035 0.029 0.029 0.032 0.026 0.035 0.029 0.024 0.029 0.029 0.029 0.035 0.024 0.032 0.032 0.032 0.000 0.000
    1 (Pagiophloeus tsushimanus); 2 (Pachylobius picivorus); 3 (Eusomus ovulum); 4 (Acalles ptinoides); 5 (Cleopomiarus meridionalis); 6 (Calvertius tuberosus); 7 (Polydrusus sericeus); 8 (Tranes lyterioides); 9 (Sympiezoscelus pencei); 10 (Ips lecontei); 11 (Ips pini); 12 (Ips typographus); 13 (Talaurinus subvittatus); 14 (Pityokteines minutus); 15 (Rhinusa bipustulata); 16 (Rhinusa neta); 17 (Barypeithes pellucidus); 18 (Anoplophora glabripennis); 19 (Anoplophora chinensis); 20 (Monochamus alternatus).

    Table 3.  p-Distance of 18S rDNA V4 gene in 20 specie (lower triangle) and standard errors (up triangle)

    1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
    1 0.008 0.005 0.005 0.005 0.005 0.005 0.006 0.005 0.005 0.005 0.007 0.006 0.005 0.006 0.006 0.006 0.005 0.009 0.009
    2 0.026 0.008 0.008 0.008 0.008 0.008 0.006 0.008 0.008 0.008 0.006 0.008 0.008 0.009 0.009 0.008 0.008 0.006 0.007
    3 0.011 0.026 0.000 0.004 0.004 0.000 0.007 0.004 0.004 0.006 0.007 0.005 0.004 0.003 0.003 0.003 0.005 0.010 0.009
    4 0.011 0.026 0.000 0.004 0.004 0.000 0.007 0.004 0.004 0.006 0.007 0.005 0.004 0.003 0.003 0.003 0.005 0.010 0.009
    5 0.011 0.026 0.006 0.006 0.000 0.004 0.007 0.000 0.004 0.005 0.007 0.005 0.004 0.003 0.005 0.005 0.003 0.010 0.009
    6 0.011 0.026 0.006 0.006 0.000 0.004 0.007 0.000 0.004 0.005 0.007 0.005 0.004 0.003 0.005 0.005 0.003 0.010 0.009
    7 0.011 0.026 0.000 0.000 0.006 0.006 0.007 0.004 0.004 0.006 0.007 0.005 0.004 0.003 0.003 0.003 0.005 0.010 0.009
    8 0.014 0.014 0.017 0.017 0.017 0.017 0.017 0.007 0.007 0.008 0.000 0.007 0.006 0.007 0.007 0.007 0.006 0.007 0.006
    9 0.011 0.026 0.006 0.006 0.000 0.000 0.006 0.017 0.004 0.005 0.007 0.005 0.004 0.003 0.005 0.005 0.003 0.010 0.009
    10 0.011 0.026 0.006 0.006 0.006 0.006 0.006 0.017 0.006 0.005 0.007 0.005 0.004 0.005 0.005 0.005 0.005 0.010 0.009
    11 0.011 0.026 0.011 0.011 0.011 0.011 0.011 0.020 0.011 0.011 0.008 0.005 0.005 0.006 0.006 0.006 0.005 0.009 0.010
    12 0.017 0.014 0.017 0.017 0.017 0.017 0.017 0.000 0.017 0.017 0.023 0.007 0.006 0.007 0.007 0.007 0.007 0.007 0.006
    13 0.014 0.023 0.009 0.009 0.009 0.009 0.009 0.020 0.009 0.009 0.009 0.020 0.005 0.005 0.006 0.005 0.005 0.010 0.009
    14 0.011 0.023 0.006 0.006 0.006 0.006 0.006 0.014 0.006 0.006 0.011 0.014 0.009 0.005 0.005 0.004 0.005 0.010 0.009
    15 0.014 0.029 0.003 0.003 0.003 0.003 0.003 0.020 0.003 0.009 0.014 0.020 0.011 0.009 0.004 0.004 0.004 0.010 0.009
    16 0.014 0.029 0.003 0.003 0.009 0.009 0.003 0.020 0.009 0.009 0.014 0.020 0.011 0.009 0.006 0.004 0.006 0.010 0.009
    17 0.014 0.026 0.003 0.003 0.009 0.009 0.003 0.017 0.009 0.009 0.014 0.017 0.011 0.006 0.006 0.006 0.005 0.010 0.009
    18 0.009 0.026 0.009 0.009 0.003 0.003 0.009 0.014 0.003 0.009 0.009 0.017 0.011 0.009 0.006 0.011 0.009 0.009 0.009
    19 0.032 0.011 0.037 0.037 0.037 0.037 0.037 0.017 0.037 0.037 0.031 0.020 0.034 0.034 0.040 0.040 0.037 0.032 0.006
    20 0.032 0.020 0.032 0.032 0.032 0.032 0.032 0.014 0.032 0.032 0.037 0.014 0.034 0.029 0.034 0.034 0.032 0.032 0.014
    1 (Pagiophloeus tsushimanus); 2 (Anoplophora chinensis); 3 (Hypera postica); 4 (Sciaphilus asperatus); 5 (Magdalis barbicornis); 6 (Bepharus ellipticus); 7 (Meira crassicornis); 8 (Lilioceris merdigera); 9 (Gymnetron antirhini); 10 Sitona striatellus); 11 (Chrysolopus spectabilis); 12 (Aulacoscelis appendiculata); 13 (Curculio glandium); 14 (Ceutorhynchus scrobicollis); 15 (Philopedon plagiatum); 16 (Araucarius minor); 17 (Hypera nigrirostris); 18 (Acalles ptinoides); 19 (Anoplophora glabripennis); 20 (Monochamus alternatus).

    Table 4.  p-distance of 18S rDNA V7 gene in 20 species (lower triangle) and standard errors (up triangle)

    1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
    1 0.015 0.017 0.017 0.016 0.015 0.016 0.016 0.017 0.017 0.017 0.009 0.009 0.016 0.019 0.019 0.019 0.018 0.017 0.014
    2 0.087 0.012 0.015 0.016 0.012 0.014 0.014 0.014 0.016 0.015 0.015 0.015 0.014 0.019 0.020 0.019 0.018 0.014 0.013
    3 0.133 0.080 0.010 0.015 0.013 0.015 0.014 0.015 0.017 0.010 0.017 0.017 0.014 0.018 0.019 0.018 0.019 0.013 0.013
    4 0.142 0.113 0.050 0.016 0.015 0.017 0.016 0.015 0.017 0.002 0.017 0.017 0.016 0.019 0.020 0.019 0.019 0.013 0.014
    5 0.129 0.115 0.115 0.124 0.017 0.017 0.018 0.018 0.019 0.016 0.016 0.016 0.017 0.018 0.019 0.018 0.017 0.015 0.016
    6 0.100 0.065 0.073 0.098 0.138 0.012 0.011 0.013 0.014 0.015 0.016 0.016 0.011 0.019 0.020 0.020 0.019 0.015 0.012
    7 0.121 0.092 0.108 0.130 0.139 0.068 0.014 0.015 0.017 0.017 0.016 0.016 0.009 0.019 0.019 0.020 0.018 0.015 0.013
    8 0.123 0.095 0.101 0.117 0.163 0.050 0.088 0.013 0.017 0.016 0.017 0.017 0.015 0.019 0.020 0.020 0.019 0.016 0.013
    9 0.139 0.085 0.114 0.123 0.163 0.080 0.115 0.081 0.018 0.015 0.018 0.018 0.015 0.019 0.020 0.020 0.017 0.016 0.014
    10 0.145 0.133 0.145 0.145 0.181 0.111 0.156 0.154 0.174 0.017 0.018 0.018 0.017 0.020 0.021 0.020 0.017 0.018 0.016
    11 0.139 0.111 0.047 0.002 0.122 0.096 0.132 0.115 0.120 0.145 0.017 0.017 0.016 0.019 0.020 0.019 0.018 0.013 0.014
    12 0.036 0.102 0.134 0.136 0.131 0.115 0.128 0.144 0.161 0.157 0.139 0.000 0.016 0.019 0.019 0.019 0.018 0.017 0.015
    13 0.036 0.102 0.134 0.136 0.130 0.115 0.128 0.144 0.160 0.157 0.139 0.000 0.016 0.019 0.019 0.018 0.018 0.017 0.015
    14 0.104 0.080 0.093 0.111 0.134 0.050 0.032 0.087 0.101 0.138 0.114 0.108 0.108 0.020 0.020 0.020 0.018 0.015 0.012
    15 0.211 0.202 0.179 0.184 0.191 0.206 0.209 0.209 0.206 0.231 0.187 0.205 0.204 0.202 0.004 0.012 0.020 0.018 0.019
    16 0.213 0.204 0.181 0.187 0.194 0.208 0.212 0.211 0.209 0.233 0.189 0.207 0.207 0.202 0.007 0.012 0.020 0.019 0.019
    17 0.215 0.202 0.186 0.187 0.182 0.213 0.212 0.236 0.221 0.238 0.189 0.205 0.204 0.202 0.070 0.073 0.019 0.019 0.019
    18 0.166 0.165 0.179 0.173 0.166 0.166 0.172 0.175 0.158 0.165 0.171 0.174 0.173 0.151 0.233 0.235 0.233 0.018 0.017
    19 0.126 0.097 0.080 0.094 0.104 0.107 0.117 0.118 0.132 0.170 0.092 0.138 0.137 0.109 0.196 0.199 0.203 0.172 0.014
    20 0.089 0.072 0.078 0.091 0.127 0.068 0.082 0.074 0.090 0.137 0.088 0.099 0.099 0.072 0.187 0.189 0.204 0.135 0.094
    1 (Pagiophloeus tsushimanus); 2 (Trichalophus caudiculatus); 3 (Aesiotes notabilis); 4 (Ambrosiodmus aegir); 5 (Aporhina australis); 6 (Araucarietius viridans); 7 (Curculio niveopictus); 8 (Eisingius chusqueae); 9 (Gymnetron tetrum); 10 (Myrmex floridanus); 11 (Sitona hispidulus); 12 (Hylobius piceus); 13 (Hylobius abietis); 14 (Curculio lateritius); 15 (Anoplophora glabripennis); 16 (Anoplophora chinensis); 17 (Monochamus alternatus); 18 (Pityokteines curvidens); 19 (Notaris acridulus); 20 (Tranes lyterioides).

    Table 5.  p-Distance of 28S rDNA D2 gene in 20 species (lower triangle) and standard errors (up triangle)

  • 表 2表 3可以看出,香樟齿喙象18S rDNA V4区序列与Pachylobius picivorus遗传距离最为接近(0.006),其次是Eusomus ovulumAcalles ptinoidesPolydrusus sericeus,均为0.012,而V7区序列遗传距离最近的是Acalles ptinoides,遗传距离0.009,其次是Hypera posticaSciaphilu asperatusMagdalis barbicornisBepharus ellipticusMeira crassicornisGymnetron antirhiniSitona striatellusChrysolopus spectabilis,遗传距离均为0.011。

  • 28S rDNA比对到的近缘种中遗传距离最近的是欧洲松树皮象、Hylobius piceus(0.036),其次是Trichalophus caudiculatusTranes lyteroides,遗传距离分别是0.087和0.089。

  • 由于COⅠ、18S rDNA(V4、V7)、28S rDNA(D2)序列分析的碱基置换度不同,因此在构建进化树前需要进行碱基置换饱和度分析,确保序列可以用于进化分析。以p距离作为横坐标,以碱基置换度作为纵坐标构建散点图(图 2),进行饱和度分析。其中COⅠ基因的检测样本中,随着样本间遗传距离(p-distance)的增大,碱基替换表现出不同的变化规律,碱基颠换与遗传距离呈明显线性关系,即随着遗传距离的增加,mtDNA COⅠ基因序列碱基转换和颠换数均呈直线增加;碱基颠换数则随着遗传距离的增加在0.14左右时超过转换数。总体上mtDNA COⅠ基因序列碱基替换数与遗传距离呈显著的线性关系,表明香樟齿喙象等象甲科昆虫种间及种内的mtDNA COⅠ基因的遗传变异丰富,该基因在物种进化中存在着巨大的进化潜能。18S rDNA的V4和V7区,保守性较强,随着遗传距离的增加,碱基的颠换值趋于饱和,但碱基转换与p距离成线性关系,碱基突变未达到饱和,适用于进化树的构建。28S rDNA D2区转换与颠换值与p距离均呈线性关系,碱基突变未达饱和,进化中存在着巨大的进化潜能,适用于进化树的构建。

    Figure 2.  Base saturation analysis of COⅠ(a), 18S rDNA V4(b), 18S rDNA V7(c), 28S rDNA D2(d) genes from Pagiophloeus tsushimanus and related species

  • 分别采用最大似然法、邻接法对香樟齿喙象扩增的四个序列片段构建系统发育树。通过比较COⅠ与rDNA的进化树发现,两种方法构建的进化树中,COⅠ序列均和外源种形成两个独立分支,且在象甲科群系里香樟齿喙象与隐喙象亚科Cryptorhynchinae的Kyklioacalles provincialis和大盾象象亚科Magdalinae的Magdalis ruficornis聚为一个群系,随即又与萧氏松茎象以及欧洲松树皮象形成的节点聚在一起,但这一分支的置信度远低于70%,与距离最远的是以鞘翅目为第二大分支的外源种群,即天牛亚科Cerambycinae的斑纹锈天牛Desisa variabilis和连纹小花天牛Nanostrangalia chujoi,外源种群的比对能更直观、系统地体现香樟齿喙象的进化关系,同时避免产生长枝吸引现象。18S rDNA序列无插入缺失现象,相较于COⅠ基因序列保守,变异程度相对较低,在V4区序列构建的进化树中,与鞘翅目中的天牛科分化明显,并且与P. picivorus聚为一支,且置信度较高,最大似然法为76%、邻接法(NJ)为78%。V7区序列构建的进化树中,香樟齿喙象与所有的象甲科种类聚在一起,与天牛科分化明显,遗传距离最远,香樟齿喙象以及其它象甲科种类形成的一个大支与隐喙象亚科的Lilioceris merdigeraAulacoscelis appendiculata形成姊妹分支。28S rDNA D2区在进行比对时,有插入、缺失现象,加权分析后的进化树中,香樟齿喙象首先与魔喙象亚科树皮象族树皮象属Hylobius的欧洲松树皮象最先聚在一起,在两种方法得到的进化树中置信度均高达99%。

3.   讨论
  • 分子标记是重建生物系统发育关系的关键。目前在鞘翅目分子系统研究中应用较多的主要为:核基因(18S rDNA、28S rDNA)以及线粒体蛋白编码基因(COⅠ、COⅡ、Cytb), 其他分子标记的应用较少[24-27],本研究中使用的3种分子标记分别为COⅠ、18S rDNA和28S rDNA。

    昆虫线粒体和核基因的碱基组成具有不同的偏好性,COⅠ基因A+T=66.76%,C+G=33.24%,A+T含量明显高于C+G含量;18S rDNA基因V4和V7区碱基A+T平均含量48.17%,C+G平均含量51.83%,C+G含量稍高于A+T含量;28S rDNA基因A+T平均含量为37.89%,C+G平均含量为62.11%,A+T含量明显高于C+G含量,此结果印证了线粒体基因碱基组成A+T碱基偏好性、核基因碱基组成C+G碱基偏好性的结论。序列分析结果显示,核基因的序列变异远低于线粒体基因,说明18S rDNA和28S rDNA相较于COⅠ基因非常保守。由于某些种群出现核内无功能的线粒体假基因(nuclear mitochondrial DNAs,NUMTS)拷贝现象,以及可遗传的内共生体对线粒体DNA结构的影响,使核基因得到广泛应用[28-29]。线粒体COⅠ碱基转换低于颠换,与鞘翅目橡实象等昆虫的COⅠ基因的研究结果相符[30]

    Figure 3.  Molecular phylogenetic relationship of Pagiophloeus tsushimanus and related species based on COⅠ, 18S rDNA V4, 18S rDNA V7, 28S rDNA D2 gene sequences

    通过构建进化树,可以发现:香樟齿喙象与隐喙象亚科的Kyklioacalles provincialis、大盾象象亚科的Magdalis ruficornis、魔喙象亚科的萧氏松茎象以及欧洲松树皮象均有较近的亲缘关系。虽然COⅠ分子标记可用于鉴定亲缘关系相近的种及种内的进化关系,且线粒体基因在评估某些近期分化中比核基因更为可靠,但置信度比较低,未能准确反应香樟齿喙象的亲缘关系,造成这种情况的原因可能是GenBank中收录的象甲COⅠ基因序列数量有限,目前鞘翅目线粒体全基因组仅获得83个,对于物种多样性丰富的鞘翅目昆虫而言,这些基因组数据用于各方面研究还远远不够[31]。相较核外线粒体的结果,香樟齿喙象的分类地位得到了核内18S rDNA与28S rDNA鉴定结果的支持。基于18S rDNA和28S rDNA序列构建的进化树中,香樟齿喙象都与魔喙象亚科树皮象族树皮象属聚在一起,且置信度超过70%,尤其在28S rDNA D2区序列构建的进化树中,香樟齿喙象与魔喙象亚科树皮象族树皮象属的H. piceus、欧洲松树皮象分支聚在一起的置信度高达99%。因此,本研究支持香樟齿喙象目前的分类地位,但其遗传多样性和种类的系统进化关系还需进一步探讨。

4.   结论
  • 本研究采用邻接法和最大似然法构建了COⅠ,18S rDNA和28S rDNA序列的系统发育树,分析香樟齿喙象与象甲科其它种类同源序列的碱基组成及系统进化特点。(1)COⅠ基因碱基组成具A+T碱基偏好性,核基因碱基组成具C+G碱基偏好性;(2)香樟齿喙象COⅠ遗传距离与欧洲松树皮象和隐喙象亚科K. provincialis最为接近,18S rDNA V4区序列与魔喙象亚科树皮象族P. picivorus遗传距离最为接近,28S rDNA中与香樟齿喙象遗传距离最近的是欧洲松树皮象和魔喙象亚科树皮象族H. piceus。(3)进化树分析可知,香樟齿喙象与同科同族的魔喙象亚科树皮象族种类遗传距离最为相近,虽然无法比对到同属下的种类,但支持香樟齿喙象归属魔喙象亚科树皮象族。

Reference (31)

Catalog

    /

    DownLoad:  Full-Size Img  PowerPoint
    Return
    Return