Toxicity Test with 8 Fungicides Against 9 Pathogens of Pecan Anthracnose ( Colletotrichum spp.)

供试的9种引起薄壳山核桃炭疽病的炭疽菌菌株分别收集自浙江、江西、安徽及云南4地薄壳山核桃感病的叶片和果实（图1），经分离纯化后于PDA斜面培养，4℃保存备用。菌种/株的详细信息见表1。

Figure 1.  Symptoms of black-spot disease of pecan

供试药剂原药均由丙酮溶解，分别配制成10 mg·L^-1的药剂母液，置于4℃冰箱保存备用。供试药剂及试验浓度梯度见表2。

马铃薯琼脂糖（PDA）培养基：去皮马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂16 g蒸馏水1000 mL。

采用菌丝生长速率法^[10]测定8种杀菌剂对炭疽病菌的毒力。按试验浓度梯度配置含药剂的PDA培养基。将病原菌于PDA培养基上，25℃下预培养5 d后，在靠近菌落边缘打取直径5 mm的菌饼，接种于含药PDA培养基上，每个处理放置1个菌饼，设置3个重复，于25℃培养箱中培养6 d后，采用十字交叉法测量每个菌落的直径，计算抑制率（抑制率=((对照组菌落直径-药剂组直径菌落直径)/对照组直径)×100%)。基于抑制率构建回归方程，并计算抑制中浓度(EC₅₀)。各处理均以丙酮为对照(CK)，每处理重复3次。

利用DPSV14.10软件构建各药剂对不同菌种/株的毒力回归方程（95%的置信限），并计算EC₅₀值。利用SPSS 19.0软件，采用单因素方差分析（One-way ANOVA，LSD）进行不同药剂EC₅₀值差异显著性分析。

建立8种药剂对C. fioriniae 6个菌株的毒力回归方程，并计算出各药剂对C. fioriniae及各菌株的抑制中浓度，结果（表3）表明：8种杀菌剂对C. fioriniae菌丝生长的抑制作用差异显著(F_(7,40)= 12.507，P<0.001）；咯菌腈、咪鲜胺、戊唑醇和恶醚唑的抑制作用最强，平均EC₅₀值分别是0.13、0.15、0.58、0.64 mg·L⁻¹；其次甲基硫菌灵、吡唑醚菌酯及嘧菌酯，平均EC₅₀值分别是4.39、5.50、7.88 mg·L⁻¹；代森锰锌的抑制效果最差，平均EC₅₀值仅为43.40 mg·L⁻¹。同一杀菌剂对同一菌种不同菌株菌丝生长的毒力也存在着差异。戊唑醇对供试的6个菌株菌丝生长抑制作用差异最大，其对JD179菌株的毒力(EC₅₀=2.46)是JD756菌株(EC₅₀=0.04)的61.5倍；其次，吡唑醚菌酯和咯菌腈2种药剂对不同菌株毒力最大差异倍数分别是55.5倍和27.0倍；甲基硫菌灵、恶醚唑、咪鲜胺、嘧菌酯对6个菌株的毒力差异变化相对小，最大差异倍数仅为1.61～3.83倍（表3）。

8种杀菌剂对C. fructicola菌丝生长的抑制作用差异显著（F_（7,56） = 7.320，P < 0.001）（表4）。咯菌腈和咪鲜胺的抑制作用最强，平均EC₅₀值分别为0.11、0.13 m·L⁻¹；对菌株JX073的抑制效果较好的杀菌剂有吡唑醚菌酯（EC₅₀ = 0.01 mg·L⁻¹）、甲基硫菌灵（EC₅₀ = 0.14 mg·L⁻¹）、咯菌腈（EC₅₀ = 0.39 mg·L⁻¹）、代森锰锌（EC₅₀ = 0.45 mg·L⁻¹）、咪鲜胺（EC₅₀ = 0.61 mg·L⁻¹）；戊唑醇对菌株JX0731（EC₅₀ = 0.53 mg·L⁻¹）抑制效果较好。

8种杀菌剂对C. nymphaeae菌丝生长的抑制作用存在显著差异（F_（7,24） = 5.35，P = 0.001）（表5）。咪鲜胺、咯菌腈和恶醚唑对菌丝生长抑制作用最好；其次为嘧菌酯、戊唑醇、甲基硫菌灵、吡唑醚菌酯；代森锰锌抑制作用最差。同一杀菌剂对不同菌株菌丝生长的毒力也存在着差异。戊唑醇的EC₅₀值变异最大，对JD043菌株的EC₅₀值是JD3的326.67倍；其次，吡唑醚菌酯、嘧菌酯和恶醚唑的毒力差异倍数分别是14.36、11.30、11.17倍；咪鲜胺、咯菌腈、代森锰锌及甲基硫菌灵对4个供试菌株的毒力差异相对稳定，毒力差异倍数为2.33～4.61倍。

8种杀菌剂对C. siamense菌丝生长的抑制作用差异显著（F_（7,8） = 22.553，P < 0.001）（表6）。咯菌腈、咪鲜胺的毒力较高，代森锰锌的抑制作用最差；吡唑醚菌酯、恶醚唑、甲基硫菌灵和戊唑醇对JX23菌株的抑制作用高于CZ622菌株，戊唑醇对2个菌株的毒力变异最大，对CZ622菌株的EC₅₀值是JX23菌株的14.34倍。

8种杀菌剂对C. alienum菌丝生长的抑制作用差异显著（F_（7,8） = 18.45，P < 0.002）（表7）。咯菌腈、咪鲜胺及恶醚唑的抑制作用相对较好，平均EC₅₀值分别为0.09、0.14、0.90 mg·L⁻¹。其次是嘧菌酯、甲基硫菌灵及吡唑醚菌酯3种药剂。同一杀菌剂对不同菌株的菌丝生长抑制作用也具有差异，戊唑醇对供试菌株抑制差异最大，最高EC₅₀值是最低值的215.69倍；咪鲜胺、恶醚唑毒力差异倍数分别是3.00、2.98倍；甲基硫菌灵、代森锰锌、吡唑醚菌酯、咯菌腈、嘧菌酯对2个供试菌株的毒力差异倍数最小，为1.34～1.79倍。

8种杀菌剂对C. tamarilloi菌丝生长的具有一定的抑制作用（表8），其中，咯菌腈、咪鲜胺和戊唑醇对C. tamarilloi菌株的抑制作用较好，EC₅₀值小于1.00；而代森锰锌的对C. tamarilloi菌株的抑制作用较差（EC₅₀ = 71.63）。

8种杀菌剂对C. americae-borealis菌丝生长的抑制作用有明显差异（表9）。咪鲜胺、咯菌腈及戊唑醇对供试菌株菌丝生长有较强的抑制作用，EC₅₀值为0.01～0.48 mg·L⁻¹；代森锰锌EC₅₀值为47.10 mg·L⁻¹，对C. americae-borealis的毒力相对较差。

8种杀菌剂对C. coelogynes菌丝的生长均存在抑制作用（表10），其中，咪鲜胺对菌丝生长抑制效果佳，EC₅₀值为0.10 mg·L⁻¹；代森锰锌和戊唑醇对菌丝生长的抑制作用较差，平均EC₅₀值为33.29和62.40 mg·L⁻¹。

8种杀菌剂对C. liaoningens菌丝的生长均表现出一定的抑制作用（表11）。8种杀菌剂中，咪鲜胺（EC₅₀ = 0.13 mg·L⁻¹）、咯菌腈（EC₅₀ = 0.24 mg·L⁻¹）及戊唑醇（EC₅₀ = 0.48 mg·L⁻¹）EC₅₀值均小于1.00，抑制效果较好。

将8种杀菌剂对26株炭疽菌的毒力进行了总体分析，结果（图2）表明：8种杀菌剂对供试菌株的毒力不同，其中，咪鲜胺和咯菌腈2种药剂对所筛选的9种炭疽菌、26个菌株的菌丝生长抑制作用最强，EC₅₀值为0.01～0.28 mg·L⁻¹，平均EC₅₀值分别为0.14和0.15 mg·L⁻¹；其次为恶醚唑，EC₅₀值为0.51～2.08 mg·L⁻¹，平均EC₅₀值为1.08 mg·L⁻¹；再次为甲基硫菌灵、吡唑醚菌酯和嘧菌酯，EC₅₀值为0.24～22.12 mg·L⁻¹，平均EC₅₀值分别为4.13、6.12、6.94 mg·L⁻¹；代森锰锌对26株炭疽菌菌丝抑制作用差异较大，EC₅₀值均在17.23 mg·L⁻¹以上，其中，3株炭疽菌EC₅₀值超过100.00 mg·L⁻¹。

Figure 2.  Virulence of 8 fungicides for 26 strains of Collelotrichum spp.

本研究采用菌丝生长速率法，测定了8种杀菌剂对9种炭疽菌、26个菌株的室内毒力，结果表明：咪鲜胺和咯菌腈对26株炭疽菌均具有较高的生长抑制作用，且菌株对其均较敏感，其次为恶醚唑和甲基硫菌灵。

炭疽菌属（Colletotrichum Cda.）是一个复杂的属，包括多个致病种，且部分种致病力极强，给农业生产带来巨大损失^{[1, 12]}。大量研究表明，不同炭疽菌种/菌株对杀菌剂的敏感性存在显著差异^[13-15]。刘霞等^[15]研究表明，咪鲜胺和戊唑醇对4株胶孢炭疽菌（C. gloeosporioides Penz.）菌丝生长的抑制作用较高，甲基硫菌灵和代森锰锌对4株胶孢炭疽菌菌丝抑制效果差异显著。高杨杨等^[11]研究认为，吡唑醚菌酯、咯菌腈对尖孢炭疽菌（C. acutatum Simmonds）的菌丝生长和孢子萌发均具有很高的抑制效果。陈圆等^[16]研究认为，25%吡唑醚菌酯乳油、50%咪鲜胺锰盐可湿性粉剂和430 g·L⁻¹戊唑醇悬浮剂对火龙果（Hylocereus polyrhizus Webb. Britton & Rose）胶孢炭疽菌的抑制效果较好。也有研究表明，甲基硫菌灵、代森锰锌和咪鲜胺等常用杀菌剂对炭疽菌引起的辣椒炭疽病的田间防治效果差^[17]；炭疽菌对甲基硫菌灵等苯并咪唑类药剂具有较强的耐受力^[18-19]。本研究结果表明，所选用的8种药剂（6类）对9种炭疽菌的菌丝生长抑制效果显著不同，且同一药剂对同种炭疽菌的毒力因菌株的不同呈现出明显差异；所筛选的咪鲜胺和咯菌腈适用性最广，对9种炭疽菌、26个菌株均具有较高的生长抑制作用，其次为恶醚唑和甲基硫菌灵；但代森锰锌对9种炭疽菌、26个菌株的抑制作用不明显。

研究表明，同一药剂的反复施用易迫使病虫产生抗药性^[20-21]。李河等^[22-23]发现，我国油茶（Camellia oleifera Abel.）苗圃炭疽病菌已对多菌灵、乙霉威和戊唑醇产生严重的抗药性。本研究结果表明，戊唑醇和代森锰锌对26个菌株的EC₅₀值差异较大，分布在0.04～100.00 mg·L⁻¹，吡唑醚菌酯和嘧菌酯次之，EC₅₀值分布在0.24～22.12 mg·L⁻¹之间，说明个别菌株对以上4种药剂敏感性可能降低；同时还发现，来自不同地理位置的菌株对不同杀菌剂的敏感性不同。浙江建德和浙江金华的菌株，对咪鲜胺、咯菌腈和戊唑醇较敏感；来自云南玉溪的菌株对咪鲜胺、咯菌腈、恶醚唑和甲基硫菌灵较敏感，安徽滁州的菌株对咪鲜胺、咯菌腈、恶醚唑和嘧菌酯较敏感；江西吉安的菌株对咪鲜胺、咯菌腈、吡唑醚菌酯和甲基硫菌灵较敏感。建议在生产中因时因地合理选择杀菌剂防治薄壳山核桃黑斑病。

由炭疽菌引起的薄壳山核桃炭疽病是目前危害薄壳山核桃的主要病害。本研究表明，咪鲜胺和咯菌腈抑制薄壳山核桃炭疽菌适用性最广，效果最佳，其次为恶醚唑和甲基硫菌灵，4种杀菌剂为防治薄壳山核桃炭疽病的有效药剂。为避免产生抗药性，建议在生产中轮换使用咪鲜胺、咯菌腈、恶醚唑和甲基硫菌灵等杀菌剂。