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油茶(Camellia oleifera Abel.)又称茶子树,属于山茶科、山茶属植物,是我国南方丘陵地区重要的木本油料树种[1]。油茶籽所榨茶油中含有大量不饱和脂肪酸,具有降低血脂、降低胆固醇、保护心血管系统等功效[2]。此外,油茶也是防风固沙和保持水土的重要树种[3]。截止2017年底,我国油茶种植面积已扩大到443万多hm2[4]。然而,在油茶林经营过程中,大量不合理施肥已造成生态环境质量下降,引起的土壤重金属含量过高、土壤环境酸化板结等问题日益突出[5]。因此,提高化肥利用效率,降低施用量,恢复退化土壤已成为我国油茶产业可持续发展突出问题。
丛枝菌根(Arbuscular mycorrhizas,AM)真菌,作为一种广泛存在于陆地生态系统的共生菌,能够改善植物对磷、氮等养分的吸收,提高植物对生物和非生物逆境的抗性[6]。随着人们对作物生产中高产、资源高效意识的不断提高,AM真菌在集约化作物生产体系中的作用日益受到关注[7]。AM真菌的生理生态功能与其群落结构密切相关,不同的AM真菌群落通常具有不同的功能[8-9]。植物种类是影响AM真菌群落结构特征的重要因素[10]。大量研究发现,在物种水平上,同一生境下共存的不同植物,其共生的AM真菌种类明显不同[11]。少量有关同一植物不同品种AM真菌群落组成的研究表明,AM真菌的群落组成受到寄主植物基因型的影响[11]。郭邵霞和刘润进[8]研究发现,牡丹基因型能改变AM真菌的侵染率和种属组成。Mao等人[12]发现,不同品种小麦AM真菌侵染率相同但群落组成不同。近年来,人们不断地筛选和培育出具有优良性状的作物新品种,并应用于生产,因此,开展同一植物不同栽培品种AM真菌群落组成的研究具有一定的理论研究和实际应用意义。
目前,关于油茶根际AM真菌种类已有相关报道[5],然而,对不同品种油茶根际AM真菌的多样性是否存在差异未见报道。为此,本研究以不同品种油茶根际土壤为研究对象,采用Illumina MiSeq高通量测序技术研究油茶不同品种AM真菌多样性,并分析AM真菌群落特征与土壤理化性质间的关系,为油茶专用菌肥研发和集约化可持续经营提供科学理论依据。
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AM真菌对5个品种油茶的主要侵染类型均为菌丝侵染,不同品种油茶AM真菌的侵染率存在差异(图1)。GX48的总侵染率最高,GW84-8的总侵染率最低。5个品种的菌丝侵染率变化规律与总侵染率基本一致。CL4和CL53的泡囊侵染率高于其他品种。CL4的丛枝侵染率高于其他品种。
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对5个不同品种油茶根际土壤进行高通量测序,共获得1 376 048条高质量序列,所有序列共归为2 538个OTUs,其中CL4、GW84-8、GW48、CL3、CL53中包含的OTU数目分别是830、931、1 163、1 103、1 012个。5个品种共有OTUs为176个,其中不同品种特有OTU数目分别是237、196、259、306、201个。总体来看,不同品种油茶根际土壤共有的微生物数量较少。
对OTUs从门到属依次进行分类,总共获得AM真菌群落1门、1纲、4目、10科、12属(表1),即为球囊菌门Glomeromycota和球囊菌纲Glomeromycetes,4个目分别为球囊霉目Glomerales(占总数的62.40%)、类球囊霉目Paraglomerales(25.32%)、原囊霉目Archaeosporales(4.28%)、多样孢囊霉目Diversisporales(0.98%);在科水平,5个油茶品种根际中共鉴定出10个科,其中球囊霉科Glomeraceae(占总数的41.12%)、类球囊霉科Paraglomeraceae(25.32%)、近明球囊霉科Claroideoglomeraceae(21.28%)等相对丰度较高,而原囊霉科Archaeosporaceae(2.22%)、双型囊霉科Ambisporaceae(2.05%)、无梗囊霉科Acaulosporaceae(0.57%)、巨孢囊霉科Gigasporaceae(0.33%)、多样孢囊霉科Diversisporaceae(0.07%)、和平囊霉科Pacisporaceae(0.02%)、地管囊霉科Geosiphonaceae(0.01%)等相对丰度较低。
目 Order 比例 Ratio 科 Family 比例 Ratio 球囊霉目 Glomerales 62.40% 球囊霉科 Glomeraceae 41.12% 近明球囊霉科 Claroideoglomeraceae 21.28% 类球囊霉目 Paraglomerales 25.32% 类球囊霉科 Paraglomeraceae 25.32% 原囊霉目 Archaeosporales 4.28% 地管囊霉科 Geosiphonaceae 0.01% 双型囊霉科 Ambisporaceae 2.05% 原囊霉科 Archaeosporaceae 2.22% 多样孢囊霉目 Diversisporales 0.98% 巨孢囊霉科 Gigasporaceae 0.33% 无梗囊霉科 Acaulosporaceae 0.57% 和平囊霉科 Pacisporaceae 0.02% 多样孢囊霉科 Diversisporaceae 0.07% 注:百分数为各目、科在所有样品中所占比例。
Notes: The percentages indicating the proportion of each order and family in all samples.Table 1. Taxonomy of AM fungal communities in rhizosphere soil of Camellia oleifera
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不同品种油茶根际AM真菌群落组成不同,其中从CL4、CL53根际土壤中均检测到12个属,而GW84-8、CL3、GX48中分别检测到11、10、9个属(图2)。球囊霉属Glomus、类球囊霉属Paraglomus、巨孢囊霉属Gigaspora和近明球囊霉属Claroideoglomus的相对丰度在5个油茶品种间具有显著差异(图2)。与其他品种相比,GW84-8中球囊霉属Glomus相对丰度(71.49%)最高,而类球囊霉属Paraglomus(6.70%)和巨孢囊霉属Gigaspora(0.02%)相对丰度最低;CL53中近明球囊霉属Claroideoglomus相对丰度(34.12%)最高,而巨孢囊霉属Gigaspora相对丰度(0.18%)最低。
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不同品种油茶AM真菌α多样性分析结果如表2所示,5个品种油茶根际土壤AM真菌的辛普森指数、Chao 1指数、ACE指数和香农指数均无显著差异,说明品种对油茶根际AM真菌多样性影响不大。
品种 Cultivar 辛普森指数(×100)Simpson index(×100) Chao 1指数 Chao 1 index ACE指数 ACE index 香侬指数 Shannon index CL3 81.61±7.67 364.01±42.41 370.50±43.17 4.70±0.56 CL4 87.59±2.76 218.74±39.49 220.51±39.62 4.57±0.31 CL53 91.26±1.81 337.09±53.75 344.70±55.72 5.25±0.36 GW84-8 92.54±1.28 318.25±39.05 320.74±37.03 5.38±0.35 GX48 93.08±1.69 358.64±52.17 364.36±54.04 5.43±0.36 0.23NS 0.20NS 0.18NS 0.43NS 注:表中 NS表示无显著差异。
Notes: NS indicating no significant difference.Table 2. Alpha diversity index of AM fungi in the rhizosphere soil of different cultivars of Camellia oleifera
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不同品种油茶根际土壤AM真菌β多样性分析结果如图3所示,第一轴从左至右的梯度基本代表品种从CL53到CL3排列,代表梯度比较短,第二轴从上至下的梯度代表品种从CL53到CL4排列,代表梯度较短。从品种分布来看,GW84-8和GX48分布较集中,而CL3、CL4和CL53分布较发散,表明CL3、CL4和CL53群落结构差异较大,而GW84-8和GX48差异较小。Adonis分析结果表明,油茶5个品种的AM真菌属水平上的群落结构存在显著差异(P<0.05)。
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RDA分析表明,土壤因子对AM真菌群落变异的解释量超过30.13%,第一排序轴解释群落变化的16.91%,而第二排序轴解释群落变化的13.22%(图4)。硝态氮对AM真菌群落结构有显著影响(P<0.05)。其中,类球囊霉属Paraglomus、巨孢囊霉属Gigaspora、原囊霉属Archaeospora、多样孢囊霉属Diversispora、无梗囊霉属Acaulospora、隔球囊霉属Septoglomus和地管囊霉属Geosiphon丰度与硝态氮正相关,而双型囊霉属Ambispora丰度与硝态氮负相关。